表达传染性法氏囊病毒VP2蛋白的重组火鸡疱疹病毒的构建.pdf

《表达传染性法氏囊病毒VP2蛋白的重组火鸡疱疹病毒的构建.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、第36卷第7期中国预防兽医学报Vo1．36．NO．72014年7月ChineseJournalofPreventiveVeterinaryMedicineJu1．2014doi：10．3969~．issn．1008-0589．2014．07．04表达传染性法氏囊病毒VP2蛋白的重组火鸡疱疹病毒的构建李奇蒙1,2，陈普成，柳金雄，姜永萍，王笑梅，田雨，胡永浩，陈化兰，(1．甘肃农业大学动物医学院，甘肃兰州730070；2．中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室／农业部动物流感重点开放实

2、验室，黑龙江哈尔滨150001)摘要：为构建表达传染性法氏囊病毒(IBDV)VP2蛋白的重组火鸡疱疹病毒(rHVT．VP2)，本研究利用RT．PCR方法扩增IBDV的vP2基因构建了重组真核表达质粒pCAGG．VP2，并采用限制性内切酶将携带Pec复合启动子和CMV增强子的VP2基因表达盒(Pec．VP2)切下，连接于Gateway系统入门质粒pENTR构建pENTR-VP2。采用GatewayLR克隆技术将pENTR—VP2与构建的重组粘粒f5354ccdBK~共同参与基因片段互换反应，构建重组粘粒

3、f5354．VP2。f5354一VP2与其他4个相互重叠覆盖HvT全基因组的粘粒经酶切线性化后共同转染CEF细胞，并拯救出重组病毒rHVT．VP2。将重组病毒在CEF细胞中连续传代20次，每隔5代采用PCR、westernblot和间接免疫荧光进行检测，结果表明VP2蛋白均得到稳定地表达。rHvT．VP2的构建为进一步研究其免疫学特性奠定了基础。关键词：传染性法氏囊病毒；火鸡疱疹病毒；VP2中图分类号：$852．65文献标识码：A文章编号：1008．0589(2014)07．0515．04Constr

4、uctionofrecombinantherpesvirusofturkeysexpressingtheVP2proteinofinfectiousbursaldiseasevirusLIQi-meng，CHENPu—cheng，LIUJin—xiong2，JIANGYong—ping~，wANGXiao—mei，TIANYu，HUYong—hao，CHENHua—lan’(1．CollegeofVeterinaryMedicine，GansuAgriculturalUniversity，Lanzl1

5、ou730070，China；2．AnimalInfluenzaKeyLaboratoryoftheMinistryAgriculture，StateKeyLaboratoryofVeterinaryBiotechnology，HarbinVeterinaryResearchInstitute，ChineseAcademyofAgriculturalSciences，Harbin150001，China)Abstract：Inordertoconstructrecombinantherpesvirus

6、ofturkeys(HVT)expressingtheVP2geneofinfectiousbursaldiseasevirus(IBDV)，theVP2genewasamplifiedfromIBDVstrainHLJ-0504byRT—PCRandclonedintoexpressionvectorpCAGGs．TheVP2expressioncassettewasconstructedwhichcontainingthePecpromoterandpoly(A)signalsequenceand

7、clonedintopENTRplasmidtoyieldtheentryclonepENTR—VP2．TheinsertionofPec-VP2cassetteintothedesireddestinationfosmidf5354ccdBK+wasdonebymixingthedestinationfosmidwithentrycloneandtreatedwithLRClonaseIIenzyme．Therecombinantvirus，designatedrHVT-VP2，wasgenerat

8、edbyCO-transfectionof5overlappingfosmidDNAswhichcoverthecompleteHVTgenome．PCR．westernblotandimmunofluorenscenceassaysindicatedthatthe1BDVVP2genewasstableexistedandexpressedover20passages．ThesedatashowedthattherecombinantHVTexpres