表达ibdv vp2蛋白的重组火鸡疱疹病毒疫苗的构建及其免疫效力试验

《表达ibdv vp2蛋白的重组火鸡疱疹病毒疫苗的构建及其免疫效力试验》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、术一命‘Ｉ‘Ｉ投埋｜＾＿祭、＊方－．．．－ｉ巧—满考．與＾－－、？Ｍｌ：分类号户－心、２０５２１＾学号．今．＾芝ｊｇ、‘—＇、＇－、Ｃ＼－或養，密级ＵＤ苗，馨聲棲叫塌硕击学住＾文＾若榮＞媛若分■＇ｙｒ’？＾、＊ｒ：＊、？户．？＇－、－；二．：（学术型）ｉ：：苗＇－－５表这巧ＤＶＶＰ２蛋白的重组火鸡疮疹病毒疫苗的构建及其免疫效力试验／＇夺击＃朱佳奪窜＃，，：气德江苏扬州—２２５００９指导教师姓名：吴艳濟教授，扬州大学，，＇申请学位级别：硕

2、壬学科专业名称：预防兽區学论文提交日期：２０１５年６月论文答辩日期：２０１５年６月３曰■－＝扬州大学学仿授予日期；２０１５年６月３０曰Ｖ：学位授予单位，：心‘＾．．Ａ心Ａ：黎部＾皆鱗＾鴻、辜續读參－■吗華每雜；？裝巧輔乐，；斯朱佳：表达阳ＤＶＶＰ２蛋白的重纽火鸡疮褒病毒疫苗的构建及其免疫效力试验丄表达巧ＤＶＶＰ２蛋白的重组火鸡瘤疹病毒疫苗的构建及其免疫效力试验摘要传染性法氏囊病（Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓｂｕｒｓａｌｄｉｓｅａｓｅ，旧Ｄ）是由传染性法氏囊病病毒（虹ｆｅｃｔｉｏｕｓｂ

3、ｕｒｓａｌｄｉｓｅａｓｅｖｉｍｓ，旧ＤＶ）引起的维鸡急性、高度接触性疾病。化ＤＶ的感染对錐鸡的法氏囊造成损伤，从而导致免疫抑制，増加了机体对其他疾病的易感性。为了克服弱毒活疫苗和中等毒力活疫苗的缺陷，本研究通过在火鸡疮疹病毒（ＨＶＴ）ＦＣ１２６毒株的ＵＳ２复制非必需区，插入旧ＤＶ超强毒株的ＶＰ２基因，构建表达ＶＰ２蛋白的重组ＨＶＴ疫苗毒株，旨在为研制预防旧Ｄ和马立克氏病（ＭＤ）的二联基因工程疫苗打下基础。－本研巧Ｗ旧ＤＶＸＤ２０１０超强毒株为模板，通过ＲＴＰＣＲ扩増其ＶＰ２基因，利用ＨＶＴＦＣ１２６疫苗株基因组Ｕ

4、Ｓ２同源序列、ＣＭＶ启动子和绿色巧光蛋白（ＥＧＦＰ）基因，构建含－有ＶＰ２基因的转移载体质粒ＰＣＭＶ－ＥＧＦＰＶＰ２，Ｗ憐酸巧沉淀法将转移载体质粒和ＨＶＴＦＣ１２６基因组ＤＮＡ共同转染鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ），通过筛选、纯化得到带ＥＧＦＰ标志－－的重组病毒ｒＨＶＴ－ＥＧＦＰＶＰ２。利用。ｅ重组酶去除ｒＨＶＴ－ＥＧＦＰＶＰ２基因姐中的ＥＧＦＰ基因ｒ－，重新转染ＣＥＦ细胞，经筛选、纯化得到不含ＥＧＦＰ基因的重组病毒ＨＶＴＶＰ２。经ＰＣ民、间接免疫巧光－（ＩＦＡ）和ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ鉴定，重组病毒ｒＨＶＴＶＰ２可正确表达ＶＰ

5、２蛋白。－在重组病毒ｒＨＶＴＶＰ２对ｒ－ＩＢＤＶ超强毒株的免疫保护试验中，设立ＨＶＴＶＰ２疫苗组、中等毒力疫苗组（Ｎ８７）、空白对照姐和攻毒对照组，从各试验组免疫后的法氏囊重量／体重（囊体比）的变化、发病率、死亡率、攻毒后的増重、抗体水平等方面进行免疫保护效－力的评价。结果发现，ｒＨＶＴＶＰ２组免疫后法氏囊正常，而Ｎ８７疫苗组免疫后法氏囊发生－了萎缩；ｒＨＶＴＶＰ２组及Ｎ８７疫苗组攻毒后的发病率、死亡率与攻毒对照组相比差异极显著攻毒后ｒＨＶＴ－ＶＰ２组体重增重显著高于Ｎ８７疫苗组本研巧所建立的间接ＥＬＩＳＡ；；利用一

6、旧ＤＶＶＴ－ＶＰ２能方法检测抗体够诱导机体产生较高水平的特异性抗体，并在，发现ｒＨ定时间内持续升高，抗体水平明湿高于Ｎ８７疫苗组；结合各组临床症状及器官病理变化，得出结论－：重组病毒ｒＨＶＴＶＰ２有效抵抗化ＤＶ超强毒株的攻击，且免疫保护效力高于Ｎ８７疫苗组。重姐病毒ｒＨＶＴ－ＶＰ２对ＭＤＶ的免疫保护试验中ｒ－，ＨＶＴＶＰ２组对ＭＤ保护率和ＨＶＴＦＣ－１２６疫苗组保护率相当，证明重组病毒ｒＨＶＴＶＰ２能使机体产生较高的免疫保护力，足Ｗ抵抗ＭＤＶＲｍＢ强毒株的攻击。２扬州大学硕壬学位论文－ＶＰ２有效抵抗旧ＤＶ超

7、强毒株攻击的同时综上所述，，本试验所构建的重组病毒ｒＨＶＴ又能刺激机体对ＭＤＶ的侵袭产生较高的免疫保护力，是理想的能够同时抵抗旧ＤＶ超强毒株及ＭＤＶ攻击的新型疫苗。关键词：ＥＬＩＳＡ传染性法氏囊病；间接；同源重姐；免疫保护效力朱佳：表达旧ＤＶＶＰ２蛋白的重组火鸡疮疹病毒疫苗的构建及其免疫效力试验至Ｃｏ打ｓｔｍｃｔｉｏｎｏｆａｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｈｅｒｅｓｖｉｒｕｓｖａｃｃｉｎｅｓｔｒａｉ打ｏｆｐｔｕｒｋｅｅｘｒｅｓｓｉｎｇＩＢＤＶＶＰ２ｒｏｔｅｉｎａｎｄｔｈｅｉｔｓｒｏｔｅｃｔｉｏｎｙｐ

8、ｐｐｅｆｆｉｃａｃｙＡｂｓｔｒａｃｔＩｎｆｅｃｔｉｏｕｓｂｕｒｓａｌｄｉｓｅａｓｅ＂ＢＤｉｓａｎａｃｕｔｅａｎｄｈｉｈｌｃ