稳定表达传染性法氏囊病病毒VP2蛋白突变体细胞系的建立.pdf

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1、浙江大学学报(农业与生命科学版)37(5)：473~478，2011JournalofZhejiangUniversity(Agric．＆LifeSci．、文章编号：1008—9209(2011)05—0473—06DOI：10．3785／j．issn．1008—9209．2011．05．001稳定表达传染性法氏囊病病毒VP2蛋白突变体细胞系的建立孙静，魏永伟，章晓栋，于涟(浙江大学动物科学学院浙江省动物预防医学重点实验室，浙江杭州310058)摘要：根据传染性法氏囊病病毒(IBDV)HZ2株VP2基因序列设计1对引物，将该基因成功克隆到真核表达载体pDsRed2一N1中，构建

2、重组质粒pDsRed2一N1一VP2(简称PVP2)；以PVP2作为过渡载体，运用PCR定点突变技术，对第279住点和第284位点的氨基酸残基分别或同时进行突变，共构建P279、P284和PDA3株突变体；在此基础上构建能稳定表达HZ2株IBDV及其突变体VP2蛋白的Vero细胞系，间接免疫荧光试验检测表明，Vero细胞系中IBDVVP2蛋白已成功表达．这为进一步深入研究IBDV毒力及抗原变异致病机制奠定了基础；此外，利用定点突变技术改造VP2蛋白，建立不同毒力的突变体，在探求高效、廉价的IBDVDNA疫苗上也有广阔的应用前景和重要意义．关键词：传染性法氏囊病病毒；VP2基因；

3、定点突变；突变体；Vero细胞系中图分类号：Q78；S858．31文献标志码：ASUNJi：ng，WEIYong—wei，ZHANGXiao—dong，YULian(Z^ejiangProvinceKeyLabofPreventiveVeterinaryMedicine，CollegeofAnimalSciences，Zhej’iangUniversity，Hangzhou310058，China)ConstructionofcelllinestablyexpressingIBDVVP2proteinmutants．JournalofZh@angUniversity(Agric

4、．&LifeSci．)，2011，37(5)：473—478Abstract：AcoupleofprimerswasdesignedonthebaseofVP2genesequenceofinfectiousbursaldiseasevirus(IBDV)HZ2strain，andtheVP2genewassuccessfullyclonedintoeukaryoticexpressionvectorpDsRed2一N1．Then，therecombinantplasmidpDsRed2一N1一VP2wasconstructed．The279siteand284siteonVP

5、2proteinweremutatedsinglyorhomeochronouslythroughsite-directedmutagenesisontheconstructedvectorpDsRed2一N1一VP2．Bythisway，threemutantsofP279，P284andPDAwereconstructedinnextstep．TheVerocelllinestablyexpressingVP2proteinandthismutantwerealsoconstructedsuccessfullyonthebaseofP279，P284andPDAbyindi

6、rectimmunofluorescencetest．Therecombinationplasmidandcelllineconstructedlaythefoundationonthedeepresearchabouttheroleandmechanismof279siteand284siteinvirulencechangeandantigenicvariationofIBDV，whichalsoplayasignificantroleinexploringmoreefficientandcheaper1BDVDNAvaccination．Keywords：infectio

7、usbursaldiseasevirus；VP2gene；site-directedmutagenesis；mutant；Verocellline鸡的传染性法氏囊病(IBD)是由传染性法性、杀淋巴细胞性的传染病，对我国养禽业构成氏囊病病毒(IBDV)引起的一种急性、高度接触了严重的威胁Ⅱ3．免疫鸡群中变异毒株和超强收稿日期：2010—09—30作者简介：孙静(1987一)，女，山东菏泽人，硕士研究生，从事分子病毒学研究．E—mail：20917060@ziu．edu．cn．通信作者：：f涟，