表达鸡传染性喉气管炎病毒gb基因的重组马立克病毒疫苗株的构建

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1、黄海琼：表达鸡传染性喉气管炎病毒gB基因的重组马立克病毒疫苗株的构建表达鸡传染性喉气管炎病毒gB基因的重组马立克病毒疫苗株的构建研究生：黄海琼导师：吴艳涛教授摘要鸡传染性喉气管炎(InfectiousLaryngotracheitis，ILT)是由鸡传染性喉气管炎病毒(InfectiousLaryngotracheitisVirus，ILTV)引起的急性呼吸道疾病。该病具有急性爆发和潜伏感染的特点，给养禽业造成巨大的经济损失。由于ILTV弱毒疫苗能引起潜伏感染，并且在鸡群中的传播会造成毒力返强，从而成为新的感染来源；因此，迫切需要研制安全、高效的新型ILT疫苗。本研究以马立克氏病

2、毒(MDV)CVl988／Rispens疫苗毒株为载体，构建表达ILTV保护性抗原gB糖蛋白的重组病毒，并分别评价重组病毒对ILT和马立克氏病的免疫效果。本研究以CVl988／Rispens疫苗毒株基因组短独特区的sorfl和sorf2作为ILTVgB基因插入位点，以网状内皮增生症病毒(REV)的长末端重复序列(LTR)为启动子、绿色荧光蛋白(EGFP)基因为报告基因，构建转移载体质粒pMDV．gB．GFP。用磷酸钙共沉淀法将pMDV-gB-GFP和CVl988／Rispens基因组DNA共转染鸡胚成纤维(CEF)细胞，获得带有EGFP标志的重组病毒；经有限稀释法纯化、筛选，获得

3、带有EGFP标志的重组病毒rMDV-gB-GFP。用Cre重组酶去除rMDV．gB．GFP的EGFP基因，得到重组病毒rMDV．gB。经PCR、间接免疫荧光试验(IFA)和Westem．blot试验鉴定，证明重组病毒rMDV-gB基因组中插入了ILTVgB基因，并能表达ILTVgB糖蛋白。本研究评价了rMDV．gB对ILTV强毒株攻击的免疫保护效果。将90只1日龄SPF鸡随机分成4组：rMDV-gB免疫组、rMDV．gB与ILTV弱毒疫苗联合免疫组、ILTV弱毒疫苗免疫组、攻毒对照组。前两组的试验鸡1日龄时分别颈部皮下接种5000空斑形成单位(PFU)的rMDV．gB：第二组和第

4、三组的试验鸡于21日龄时接种l羽份的ILTV弱毒疫苗；42日龄时，各组试验鸡均用105EID50／鸡的ILTV强毒株攻击。观察试验鸡的症状表现，并于攻毒后第10天进行剖检和病理组织学检查。结果显示，在ILTV强毒株攻击后，rMDV-gB免疫组的保护率为65％，而ILTV弱毒疫苗组的保护率为41％，rMDV．gB的保护效力明显高于ILTV弱毒疫苗。本研究还发现，在1日龄雏鸡接种rMDV．gB后，再于扬州大学硕士论文21日龄接种ILTV弱毒疫苗，并不能提高对ILTV强毒株攻击的保护作用；表明1日龄雏鸡接种rMDV．gB后就能建立起针对ILTV的有效免疫力。本研究还评价了rMDV．gB

5、对MDVRBlB超强毒株攻击的免疫保护效果。将60只1日龄SPF鸡随机分为3个试验组：rMDV．gB免疫组、CVl988／Rispens免疫组、攻毒对照组，每组20只试验鸡；rMDV．gB免疫组和CVl988／Rispens免疫组的试验鸡分别于1日龄时颈皮下接种5000PFU／鸡的相应疫苗；7日龄时，所有试验鸡经腹腔接种500PFU／鸡的MDVRBlB超强毒株。连续观察90天，记录各试验组鸡的发病和死亡情况。经统计，攻毒对照组90％的鸡死于马立克氏病，而rMDV．gB免疫组和CVl988／Rispens疫苗组的保护率均为100％，表明rMDV．gB可对MDV超强毒株的攻击能产生足

6、够的保护。关键词：鸡传染性喉气管炎病毒；马立克病毒；gB糖蛋白；同源重组；免疫效力黄海琼：表达鸡传染性喉气管炎病毒gB基因的重组马立克病毒疫苗株的构建ConstructionofaccineStrainofRecombinantMarekCClneStrainoIRecomDinantare’S-DiseaseVirusExpressingGlycoproteinBofInfectiousLaryngotracheitisVirusM．S．canditade：HaiqiongHuangAdvisor：Prof．Yantao胁AbstractTheinfectiouslaryngo

7、tracheitis(ILT)isanacuteandhighlycontagiousdiseaseofchickenscharacterizedbylatentinfection．TheattenuatedlivevaccinesofILTremainedavarietyofsideeffectsincludingspreadingvaccinevirustonon-vaccinatedanimals，increasingvirulenceduringinvivopassage