表达非洲猪瘟病毒p72抗原重组新城疫病毒的拯救及其免疫效果评价

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1、密级：论文编号:中囯农北科学院学位论文表达非洲猪瘟病毒p72抗原重组新城疫病毒的拯救及其免疫效果评价RecoveryandEvaluationofImmuneResponsesInducedbyaRecombinantNewcastleDiseaseVirusExpressingAfricanSwineFeverVirusAntigenp72硕士研究生：陈新新指导教师：殷宏研宄员申请学位类别：农学硕士专业：预防兽医学研究方向：兽医微生物及其分子生物学培养单位：兰州兽医研宄所研宄生院2015年5月密级:论文编号:中国农业

2、科学院学位论文表达非洲猪瘟病毒p72抗原重组新城疫病毒的拯救及其免疫效果评价RecoveryandEvaluationofImmuneResponsesInducedbyaRecombinantNewcastleDiseaseVirusExpressingAfricanSwineFeverVirusAntigenp72硕士研究生：陈新新指导教师：殷宏研究员申请学位类别：农学硕士专业：预防兽医学研究方向：兽医微生物及其分子生物学培养单位：兰州兽医研究所研究生院2015年5月Secrecy:No.ChineseAcadem

3、yofAgriculturalSciencesDissertationRecoveryandEvaluationofImmuneResponsesInducedbyaRecombinantNewcastleDiseaseVirusExpressingAfricanSwineFeverVirusAntigenp72M.S.Candidate：ChenXinxinSupervisor：YinHongMajor：PreventiveVeterinaryMedicineSpecialty:VeterinaryMicrobiol

4、ogyandMolecularBiologyMay2015独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中国农业科学院或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：时间：年月日关于论文使用授权的声明本人完全了解中国农业科学院有关保留、使用学位论文的规定，即：中国农业科学院有权保留送交论文的复印

5、件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意中国农业科学院可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。研究生签名：时间：年月日导师签名：时间：年月日中国农业科学院硕士学位论文评阅人、答辩委员会签名表论文题目论文作者专业研究方向指导教师培养单位（研究所、中心）姓名职称单位专业签名评阅人答辩主席答辩委员会议记录（秘书）论文答辩时间地点摘要非洲猪瘟是由非洲猪瘟病毒引起的猪的一种出血性、高致死性疾病。自1921年在肯尼亚被发现以来，到目前为止已经传播到很多国家。近

6、年来在高加索地区的流行尤其频繁，我国与俄罗斯接壤，边境地区的软蜱和野猪的存在使非洲猪瘟传入我国的风险加大。有关非洲猪瘟疫苗的研究很多，但至今仍没有商业化的疫苗可用。关于非洲猪瘟的免疫保护机制目前还不清楚，体液和细胞免疫在其中发挥的作用也各有说法。本研究利用反向遗传操作技术，以新城疫病毒作为载体，构建了表达非洲猪瘟病毒p72蛋白的重组病毒疫苗，并且在小鼠模型上从体液和细胞免疫反应两方面对其进行了评价。本研究首先在本实验室改造的新城疫病毒致弱株MG7的P和M基因之间引入PmeI酶切位点，将非洲猪瘟病毒的p72基因插入到MG

7、7基因组的P和M基因之间。将全长克隆和辅助质粒通过脂质体转染法转染至重组痘病毒处理后的BHK-21细胞拯救出重组病毒，命名为rNDV/p72。从四个方面对重组病毒的生物学特性进行了鉴定：通过免疫印迹实验鉴定了非洲猪瘟病毒p72蛋白的表达；连续传代10次后经测序证实了p72基因稳定遗传；比较了该重组毒和亲本毒对鸡胚、雏鸡和小鼠的致病性以及在BHK-21细胞上的生长特性，外源基因的插入使得病毒的毒力降低，其在细胞上的生长能力也略有降低。进一步利用BALB/c小鼠模型对重组病毒的免疫效果进行了评价。将所述重组病毒rNDV/p

8、72经肌肉注射免疫BALB/c小鼠，同时设亲本毒对照组和PBS对照组；每隔两周进行一次免疫，共免疫四次。在第三次和第四次免疫一周后，通过酶联免疫吸附试验（ELISA）检测小鼠血清中诱导产生的p72特异性IgG抗体以及IgG亚型IgG1和IgG2a抗体的含量。四免二周后，取小鼠的脾脏分离淋巴细胞通过ELISOPT实验检测细胞因子IL