产纤维素酶菌株pantoea ananatis p5的筛选鉴定和活性研究

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1、第28卷第4期徐州工程学院学报(自然科学版)2013年12月Vo1．28No．4JournalofXuzhouInstituteofTechnology(NaturalSciencesEdition)Dec．2O13产纤维素酶菌株PantoeaananatisP5的筛选鉴定和活性研究侯进慧，刘彤，李同祥(徐州工程学院，江苏{余州2211l1)摘要：对一种新型纤维素酶产生菌株P5进行了筛选鉴定和活性研究．该纤维素酶产生菌株在中国普通微生物保藏管理中心的保藏号是CGMCCNO．5356．利用产纤维素酶菌株筛选培养基，从土壤中筛选到一株产生纤维素酶菌株P5，对该菌株进行了分子鉴定和纤维素酶活

2、性分析．结果显示，菌株P5分类上是Pantoeaananatis菌株，其纤维素酶适应温度和酸碱度范围较广，可应用于生物、食品、能源、纺织等领域．关键词：纤维素酶；Pantoeaananatis；分类中图分类号：Q93-331文献标志码：A文章编号：1674—358X(2013)04—0080—05在地球上，纤维素是自然界中分布广泛且产量最丰富的一种碳水化合物资源，但是由于降解困难，导致纤维素资源的利用率非常低．比如秸秆和皮壳等纤维素含量高的原料大部分都被焚烧掉，这样做既危害生态平衡，又加重了环境污染．纤维素分子可以被纤维素酶降解成小分子，并最终降解成葡萄糖．纤维素酶是一个酶系，能水解J

3、3—1，4一葡萄糖苷键．纤维素酶的研究是纤维素资源综合利用的基础_1]．微生物是个巨大的基因资源库，其中含有多种有价值的生物酶．目前，用于纤维素生物降解研究的微生物大多属于真菌，而在细菌中筛选开发高效纤维素降解菌和纤维素酶的研究相对较少．纤维素降解细菌的研究大多集中在芽胞杆菌类，在Pantoeaananatis方面的研究未有报道l3]．随着分子生物学、基因工程的迅猛发展，国内外均尝试应用基因工程技术来筛选、改造和构建高效纤维素降解菌株、开发新型高效的纤维素酶．因此，需要通过生物技术方法加大对细菌纤维素酶的研究，以开发出新型的纤维素酶]．本文采用产纤维素酶菌株筛选培养基，获得一株纤维素酶

4、产生菌P5，对菌株进行了鉴定，并对该菌株纤维素酶特性进行了分析．1技术特征本文属于生物技术领域，涉及一株纤维素酶产生菌P5及其筛选及菌种鉴定的方法，所筛选到的细菌的纤维素酶适应温度和酸碱度范围较广．该菌属于Pantoeaananatis菌株，已于2011年10月17日保藏于中国普通微生物保藏管理中心．1)筛选到的一株纤维素酶产生菌，在中国普通微生物保藏管理中心进行了专利菌种保藏，其保藏号为：CGMCCNO．5356．2)所述纤维素酶产生菌P5的制备方法，其特征在于：从腐烂植物枝叶表面及附近的土壤中分离样品，样品加入5omLLB培养基中，在250mL锥形瓶中，以160r／min转速于37

5、℃培养24h涂布于LB固体平板上，获得菌株；所述LB液体培养基组分为：每升蒸馏水中含有蛋白胨10g，酵母粉5g，NaC110g；所述IB固体平板组分为：每升蒸馏水中含有蛋白胨10g，酵母粉5g，NaC110g，琼脂粉12g．将菌落接种到产纤维素酶菌株筛选培养基，于培养温箱中培养2～4d，筛选纤维素酶的产生菌，所用的培养基为：每升培养基中含有羧甲基纤维素钠10g，蛋白胨10g，酵母粉5g，KHPO1g，MgSO0．2g，收稿日期：2Ol3-07—29基金项目：江苏省高校自然科学基金面上项目(12KJD55OO03)，徐州工程学院校级培育课题专利号：2ol110348074．0作者简介：侯

6、进慧(1980～)，男，江苏徐州人，副教授，博士，主要从事生物工程研究．·80·侯进慧，等：产纤维素酶菌株PantoeaananatisP5的筛选鉴定和活性研究NaCI10g，葡萄糖2g，琼脂粉12g，以蒸馏水补足体积至1I；将质量分数0．5的刚果红染液对产纤维素酶菌株筛选培养基染色5min，倒掉燃料并用水冲洗，加入适量质量分数5的NaCI溶液脱色30min到1h，观察透明水解圈，筛选产纤维素酶菌株．3)克隆分析菌株16SrDNA．克隆16SrDNA基因的上游引物是：AGAGTTTGATccTGGCTCAG，下游引物是：GGTTACCTTGTTACGACTT．4)所述纤维素酶产生菌P5

7、的应用，其特征在于：所述纤维素酶产生菌应用于生产纤维素酶．2实验与讨论2．1材料1)培养基L7液体LB培养基：蛋白胨10g，酵母粉5g，NaC110g，定容至1【固体LB培养基：蛋白胨10g，酵母粉5g，NaC110g，琼脂粉12g，定容至1L．固体产纤维素酶菌株筛选培养基：羧甲基纤维素钠10g，蛋白胨10g，酵母粉5g，KHPO1g，MgSO0．2g，NaC110g，葡萄糖2g，琼脂粉12g，定容至1L．液体发酵培养基：羧甲基纤维素钠10g，