[精品]产纤维素酶低温菌株的分离鉴定

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1、产纤维素酶低温菌株的分离鉴定产纤维素酶低温菌株的分离鉴定摘耍：为促进秸秆还田，加快秸秆在北方设施土壤中的降解速度，以腐烂秸秆为待筛菌株原料，以玉米秸秆粉为培养基，在15°C低温条件下，采用刚果红平板法进行初筛，得到16株菌株，对16株菌株进行酶活测定复筛，其中L-13酶活最高，达1679.61U/mlo对L-13菌株的菌体形态、菌落特征进行观察，并进行了一系列生理生化试验和16SrDNA序列分析，初步鉴定L-13为枯草芽抱杆菌(Bacillussubtilis)o此菌可以在15°C下快速生长繁殖并高产纤维索酶，低温条件下能快速降解秸秆。关键词

2、：玉米秸秆；低温；纤维素酶中图分类号:Q93-331文献标识号:A文章编号：1001-4942(2014)03-0054-04AbstractinordertopromotestrawreturningandspeedupitsdegradationintheNorthgreenhousesoil,usingrottenstrawasrawmaterialsandcornstrawpowderasmedium,16strainswereisolatedwithCongoRedplatemethodat15°C・Thentheenzymeact

3、ivitiesof16strainsweredetected.L-13hadthehighestenzymeactivityof1679・61U/m1.ThemycelialmorphologyandcolonycharacteristicsofL~13wereobserved,andaseriesofphysiologicalandbiochemicaltestsand16SrDNAsequenceanalysiswereconducted.TheL~13strainwaspreliminarilyidentifiedasBacilluss

4、ubtilis・Owingtogrowingfastlyandhighyieldingofcellulaseat15°C,itcoulddegradethestrawtinderlowtemperaturerapidly.KeywordsCornstraw；Lowtemperature；Cellulase我国的玉米秸秆资源分布较广，是一种易得的可再生生物资源。目前秸秆的主耍用途是秸秆还田和制备粗饲料，但用量总和不足秸秆总量的40%,其余则被焚烧掉，造成了极大的资源浪费和环境污染。为了进一步提高秸秆的利用率，加快秸秆的降解速度，尤其是低温条件下

5、的降解效率，以满足北方冬季设施秸秆还田的需要，本试验在低温（15°C）环境下，筛选出了玉米秸秆低温快速腐熟菌，并进行了菌株鉴定，以期为北方冬季设施秸秆还田提供科学依据。1材料与方法1.1材料与试剂1.1.1材料玉米秸秆，采自朝阳市郊区，粉碎后用于腐熟菌的筛选。1.1.2试剂0.05mol/L醋酸-醋酸钠缓冲液;3,5-二硝基水杨酸显色液（DNS）；0.5%竣甲基纤维素钠溶液；0.2mg/ml纤维素酶;2mol/L盐酸溶液。1.1.3培养基分离培养基：玉米秸秆粉20g,琼脂20g,水1000ml,121°C灭菌30min,备用。筛选培养基：刚果

6、红纤维素钠培养基，见《微生物学实验》。液体发酵培养基：牛肉膏3g,蛋白腺10g,NaCl5g,水1000ml,pH7.0〜7.2,121°C灭菌30min,备用。生理生化鉴定培养基及试剂见《常见细菌系统鉴定手册》。1・1・4仪器设备高速冷冻离心机、凝胶成像系统、恒温水浴锅、PCR仪、电泳仪、恒温培养箱、731型分光光度计等。1.2试验方法1.2.1低温降解纤维素菌株的分离将腐烂的玉米秸秆（含待筛菌株）粉碎，取0.5g加入49.5ml无菌水，置于振荡器上振荡30min,后吸取1ml加入9ml无菌水，以此类推，共稀释到10~9o吸取0.1ml不同

7、倍数稀释液于筛选培养基上，涂平板，15°C低温条件下培养，直到形成单菌落。1.2.2低温降解纤维素菌株初筛将所得单菌落分别挑到刚果红纤维素钠平板屮，每个平」IIL一种菌株，重复3次，15°C恒温箱屮倒置培养48ho观察平板，标记有水解圈的菌株、测量水解圈直径并记录试验结果。1.2.3低温降解纤维素菌株复筛原样酶液制备：将初筛所得菌株分别转接到液体发酵培养基中，15°C培养48h,取发酵液1ml于EP管中，10000r/min离心10min,上清液即为原样酶液。DNS法测酶活力：取3支容量为20.0ml的试管，一支做空白对照，其余2支做平行样晶

8、管。取1.0ml原样酶液加入样品管屮，后向3支试管中分别加入4.0ml预热至60°C的底物溶液，60°C水浴准确计时20min取出,立即加入1.0ml2.0mol/