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《款冬花中抑制肺癌细胞LA795增殖的活性成分研究.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、第48卷第1期复旦学报(自然科学版)Vol.48No.12009年2月JournalofFudanUniversity(NaturalScience)Feb.2009文章编号:042727104(2009)0120125205款冬花中抑制肺癌细胞LA795增殖的活性成分研究1112刘可越,刘海军,吴家忠,张铁军(1.九江学院基础医学院,江西332000;2.天津药物研究院,天津300193)摘要:分析研究了款冬花中具有抑制肺癌细胞增殖的活性成分.以小鼠肺腺癌LA795细胞为体外抑瘤筛选模型,利用四甲基偶
2、氮唑盐(MTT)比色法,结合硅胶柱色谱,SephadexLH220,PHPLC等手段追踪分离款冬花抗肺癌的活性成分.并通过理化和波谱分析方法鉴定了单体化合物的结构.它们分别是:1,22di2(3′,4′2dihydroxycinnamoyl)2cychopenta232ol,(Ⅰ)、芦丁(Rutin,Ⅱ)、山奈酚(Kaemferol,Ⅲ)、槲皮素(Quercetin,Ⅳ)、异槲皮苷(Isoquercitrin,Ⅴ).其中(Ⅰ)为新化合物,化合物(Ⅴ)为首次从款冬花中分离得到.并采用MTT法对分得的化合物
3、进行抑制LA795细胞株增殖作用的研究,用半数抑制浓度(IC)评价其抗肿瘤活性.结果表明化合物Ⅰ,Ⅲ,Ⅳ对小鼠肺腺癌细胞LA795的增殖都显示出一定的抑制作用.其中化合物Ⅰ和Ⅳ抑瘤作用较显著.IC50分别为125.2和83.2μg/mL.这些化合物抗肺癌细胞增殖活性为款冬花中首次发现.关键词:款冬花;肺癌;1,22di2(3′,4′2dihydroxycinnamoyl)2cychopenta232ol;槲皮素中图分类号:R284.1;R284.5文献标志码:A肺癌是临床最常见的恶性肿瘤之一,近20年来
4、,其病死率在恶性肿瘤中上升幅度最大,已居首位.中医药是我国治疗肺癌的特色疗法,近年来应用辨证论治、专方专药治疗肺癌均有一定的进展,在稳定病[1]灶、改善症状、提高生存质量等方面具有较大的优势.笔者经文献调研发现,诸多医学名著记载中药款[225]冬花可用于治疗肺癌,尤擅治疗肺腺癌.款冬花(TussilagofarfaraL.)为菊科款冬属植物款冬的干燥花蕾.《本草纲目》中记载其性温、味辛,主[6]治咳逆上气善喘,肺痿肺痈,吐脓血等症.现在我国亦有很多中医名家将款冬花入复方治疗肺癌,但由于缺乏对款冬花抗肺癌
5、的药效物质基础的系统研究,即具体是哪些成分能有效的治疗肺癌尚未明确,这严重影响了款冬花临床上的推广使用,并且其活性成分不明确也成为制约款冬花进入国际药品市场的瓶颈问题.因此本实验以研究款冬花中抗肺癌细胞增殖的活性成分为主要目的,运用化学分离与药理活性追踪相结合的方法,以肺腺癌LA795细胞为体外抑瘤筛选模型,用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法作为抗肿瘤活性测定方法,利用硅胶柱色谱、葡聚糖凝胶柱色谱等分离手段对款冬花的抗肺癌活性成分进行系统分离,并利用MTT法以IC50为指标对分得化合物进行了抑制肺腺癌LA
6、795细胞增殖的活性研究.1仪器与材料X4显微熔点测定仪;NicoletImapact410型红外光谱仪;BrukerAV2400核磁共振仪(TMS为内标);HP5973NMSD型质谱仪;Bio2Rad3550型酶标仪.薄层色谱和柱色谱用硅胶为青岛海洋化工厂出品,柱层析用SephadexLH220为Pharmacia公司产品,上海化学试剂厂进口分装;52氟尿嘧啶注射液(52FU,上海旭东海普药业有限公司,批号050615).胎牛血清(杭州四季青牛物工程材料公司产品),RPM11640和胰蛋自酶(美国GI
7、BCO公司).款冬花药材购自河北安国中药材市场,由天津药物研究院张铁军研究员鉴定.收稿日期:2008207207基金项目:天津市科技计划发展资助项目(043180911)作者简介:刘可越(1978—),女,博士,副教授,E2mail:elliee12345@yahoo.com.cn.126复旦学报(自然科学版)第48卷2提取与分离10kg干燥的款冬花药材,粉碎后用85%乙醇回流提取2次,每次3h.合并提取液,减压回收溶剂,得粗提物.将粗提物悬浮于水中,依次以石油醚、醋酸乙酯、水饱和正丁醇萃取,浓缩干燥得
8、各萃取部位浸膏.采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法),进行抑制肺癌细胞LA795增殖的活性测试,结果表明正丁醇萃取部位显示较好活性.所以对其进行活性追踪分离.取正丁醇萃取物60g经硅胶柱色谱层析,分别以氯仿-甲醇梯度(V氯仿∶V甲醇=95∶5,10∶1,7∶1,5∶1,3∶1,2∶1)洗脱,得到Fr.1～6馏分.活性测试表明Fr.2,Fr.3,Fr.5具有较好的体外抑瘤活性.因此对以上三部分继续追踪分离.Fr.3(V氯仿∶V甲醇=7∶1)馏
