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《结核分枝杆菌CFP10_ESAT6融合蛋白的克隆表达及效价测定.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、中国防痨杂志2006年8月 第28卷第4期·221··论著·结核分枝杆菌CFP102ESAT6融合蛋白的克隆表达及效价测定都伟欣 陈保文 沈小兵 苏城 王国治(中国药品生物制品检定所 北京 100050)摘要:目的 在大肠杆菌中表达结核分枝杆菌RD1区CFP102ESAT6融合蛋白,测定融合蛋白对结核分枝杆菌致敏豚鼠的效价。方法 以结核分枝杆菌标准株H37Rv为模板,采用OverlapPCR方法扩增CFP102ESAT6融合基因,并克隆入pET230a质粒,IPTG诱导工程菌表达融合蛋白,离子层析柱分离纯化融合蛋白
2、。以结核分枝杆菌致敏豚鼠进行皮肤变态反应(DTH)测定。结果 结核分枝杆菌融合蛋白在大肠杆菌中以可溶形式表达,融合蛋白占总菌体蛋白的30%以上,经离子层析柱纯化纯度达95%以上。重组蛋白可诱导结核分枝杆菌致敏豚鼠产生迟发型超敏反应,2.5μg/ml重组蛋白诱导豚鼠皮试反应与TB2PPD(50IU/ml)等效。结论 重组融合蛋白有望成为结核感染皮试诊断用新试剂。关键词:分枝杆菌,结核;重组CFP102ESAT6融合蛋白;豚鼠;皮试Clone,expressioninE.coliandefficiencymeasure
3、mentofrecombinantCFP10-ESAT6fusionproteinsfromMycobacteriumturberculosisDuWeixin,ChenBaowen,ShenXiaobing,etal.NationalInstitutefortheControlofPharmaceutical&BiologicalProducts,Beijing100050,ChinaAbstract:ObjectiveTherecombinantCFP102ESAT6fusionproteincodingbyt
4、hegeneslocatedinRD1regionsofgenomeofMycobacteriumtuberculosiswasexpressedinE.coli,anditsskinreactionsweredetectedinguineapigs.MethodsAgenomicDNAofMycobacteriumtuberculosisH37Rvstrainwasusedastemplate,amplifiedthecfp102esat6fusiongenebyOverlapPCR.PCRproductionw
5、asclonedintopET230aplasmid.TherecombinantE.coliwasinducedbyIPTG.Thesupernatantliquidofcentrifugalultrasonicbacteriawaspurifiedthroughanioncolumn.SkinreactionsoffusionproteinweretestedinguineapigsinfectedwithM.tuberculosis.ResultsThefusionproteinswasexpressedas
6、solublestateinE.coli.ThecontentofrecombinantCFP102ESAT6fusionproteinswasmorethan30%oftotalproteins,andmorethan95%puritywasacquiredthroughan2ioncolumn.ThefusionproteinscouldinduceDTHinguineapigsinfectedwithM.tuberculosisand2.5μg/mlrecombinantproteinsinducedthes
7、ameDTHasPPD(50IU/ml).ConclusionTherecombinantCFP102ESAT6fusionproteinsishopefultobecomenewskintestreagentinthedifferentialdiagnosisoftuberculosis.Keywords:Mycobacteriumtuberculosis;RecombinantCFP102ESAT6fusionproteins;Guineapig;Skinre2action 结核病是世界卫生组织公布的危害人类
8、健康此方法的关键是获得特异性的诊断用抗原。20世的十大疾病之一。我国属于世界上结核病严重流纪20年代国外学者从液体培养的结核杆菌裂解的行的国家。结核病的快速诊断是全球控制结核病可溶性产物中浓缩过滤得到旧结核菌素(OT),用的重要措施。在结核病的快速诊断方法中,皮肤实于结核感染皮试诊断,但OT成份复杂。我国学者验的免疫学检测方法是最易于推广和廉价的方法。于20
