鹿结核分枝杆菌流行株Rv3874-Rv3875融合基因的克隆及原核表达

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1、第18卷第4期经济动物学报Vol.18No.42014年12月JournalofEconomicAnimalDec．2014鹿结核分枝杆菌流行株Ｒv3874－Ｒv3875融合*基因的克隆及原核表达12311221，4＊＊曾范利，王文玉，宋纪伟，时坤，李健明，刘东旭，刘杨，杜锐(1．吉林农业大学中药材学院，长春130118;2．吉林农业大学动物科学技术学院，长春130118;3．吉林市人民医院，吉林132001;4．教育部动物生产及产品质量安全重点实验室，吉林省药用动物二级实验室，长春130118)摘要:以吉林农业大学经济动物疾病实验室分离并保存的鹿结核分枝杆菌流行株为模板，利用

2、重叠延伸剪接技术(Splicingbyoverlapextension，SOE)设计引物，克隆Ｒv3874－Ｒv3875融合基因，构建重组表达质粒pGEX－4T－1－Ｒv3874－75，在大肠杆菌BL21(DE3)中经IPTG诱导表达，并对目的蛋白进行纯化，表达产物通过SDS－PAGE和Westernblot进行分析。结果表明:测序后融合基因Ｒv3874－Ｒv3875的序列与GenBank中序列的符合率为100%，重组表达质粒pGEX－4T－1－Ｒv3874－75在大肠杆菌中成功诱导表达，获得可溶性表达的融合蛋白，经SDS－PAGE分析该蛋白的相对分子质量约49ku，经West

3、ernblot鉴定纯化好的融合蛋白能与鹿结核病的阳性血清发生反应，具有良好的反应原性。关键词:鹿结核分枝杆菌;流行株;融合基因;克隆;原核表达中图分类号:S858.94;Q78文献标识码:A文章编号:1007-7448(2014)04-0209-05引文格式:曾范利，王文玉，宋纪伟，等．鹿结核分枝杆菌流行株Ｒv3874－Ｒv3875融合基因的克隆及原核表达［J］．经济动物学报，2014，18(4):209-213．DOI:10．13326/j．jea．2014．1030CloningandProkaryoticExpressionofＲv3874－Ｒv3875FusionGen

4、eofDeerMycobacteriumtuberculosisEpidemicStrains123112ZENGFan-li，WANGWen-yu，SONGJi-wei，SHIKun，LIJian-ming，LIUDong-xu，LIU21，4Yang，DUＲui(1．CollegeofChineseMedicineMaterials，JilinAgriculturalUniversity，Changchun130118，Chi-na;2．CollegeofAnimalScience＆Technology，JilinAgriculturalUniversity，Changch

5、un130118，China;3．JilinPeople'sHospital，Jilin132001，China;4．KeyLaboratoryofAnimalProduction，ProductQualityandSecurity，MinistryofEducationofthePeople'sＲepublicofChina，Level2La-boratoryofMedicalAnimalofJilinProvince，Changchun130118，China)Abstract:FusiongeneＲv3874－Ｒv3875wasclonedbyGene－SOEusingt

6、hegenomicDNAofdeermycobacteriumtuberculosiswildstrainthatwereseparatedandsavedinlaboratoryofeconomicanimaldiseaseofJilinAgriculturalUniversityastemplateastemplate．ThenthePCＲproductwastransformedintopGEX-4T-1togainprokaryoticexpression．ConstructedrecombinantplasmidpGEX-4T-1-Ｒv3874-75wasinduce

7、dwithIPTGinE．coliBL21(DE3)．Thepurposeproteinwaspu-＊基金项目:国家科技支撑计划项目(2011BAI03B02－1)，国家自然科学基金项目(31372436)，吉林省科技厅科技支撑计划项目(20120225)，吉林省科技厅科技成果转化促进计划项目(20125067)作者简介:曾范利，女，博士，讲师，主要从事经济动物疫病研究。收稿日期:2014-08-07＊＊通讯作者:杜锐，E-mail:durui71@126．com210经济动物学报2014年