结核分枝杆菌esat6-rpfD融合基因的原核表达及产物纯化

《结核分枝杆菌esat6-rpfD融合基因的原核表达及产物纯化》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、生技术通讯LErrI’ERSINBIOTECHNOLOGY⋯Vo1．20No．4Ju—ly，2009479doi：10．3969／j．issn．1009-0002．2009．04．007研究报告结核分枝杆菌esat6一rpfO融合基因的原核表达及产物纯化何俊杰，柏银兰，王丽梅，张薇，康健，徐志凯第四军医大学微生物学教研室，陕西西安710032[摘要]目的：构建结核分枝杆菌融合基因esat6-rpfD的原核表达载体，表达和纯化ESAT6一RpfD融合蛋白。方法：从结核分枝杆菌H37Rv株基因组中经PCR分别扩增esat6和rpfO基因，克

2、隆入pMD19一T载体，测序后克隆入原核表达载体pProExHTB，酶切重组质粒，转化大肠杆菌DH5c~，IPTG诱导表达融合蛋白，亲和层析纯化融合蛋白。结果：PCR扩增的esat6、rpfO基因序列与GenBank报道一致；诱导表达后，经SDS—PAGE和Westernblot分析，在相对分子质量约30000处有目的条带，融合蛋白以包涵体形式表达。结论：构建了esat6-rpfD融合基因原核表达载体，并在大肠杆菌中表达并纯化得到ESAT6一RpfD融合蛋白。[关键词]结核分枝杆菌；esat6一rpfO融合基因；原核表达；纯化[中图分类

3、号]Q78[文献标识码]A[文章编号]1009—0002(2009)04—0479—03ExpressionofMycobacteriumtuberculosisesat6-rpfDFusedGeneinEscherichiacoliandPurificati0nOfFusionProteinHEJun—Jie，BAIYin-Lan,WANGLi-Mei，ZHANGWei，KANGJian，XUZhi-KaiDepartmentofMicrobiology，theFourthMilitaryMedicalUniversity，Xian7

4、10032，China[Abstract】Objective：ToconstructprokaryoticexpressionvectorofMycobacteriumtuberculosisesat6-rpfDfusedgeneandexpressandpurifythefusionproteinESAT6-RpfDinE．coli．Methods：Theesat6andrpfOgeneswereamplifiedbyPCRfromM．tuberculosisH37Rvgenome．GeneswereclonedintopMD19一T

5、Vector．AfterDNAanalysis，thegenesweresubclonedtoprokaryoticexpressionvectorpProExHTBandconfirmedbyrestrictiveenzymesdigestionanalysis，ThentherecombinantplasmidwasexpressedinE．coliDH5o~．Therecombinant6~HisfusedproteinwhichinducedbyIPTGwerepurifiedthroughNi—NTApurifications

6、ystem．Results：esat6and，z)geneswereidentifiedbyGenBankreport．ThefusionproteinexpressedinE．coliDH5awasinsolubleandshowedthemolecularweightof30000throughSDS—PAGEandWesternblot．Thenthe6xHisfusionproteinswerepurifiedbyafinitychromatography．Conclusion：Theprokaryoticex—pression

7、vectorofM．tuberculosisesat6-rpfDwasconstructed，andthefusionproteinexpressedinE．coliwaspurified．[Keywords]Mycobacteriumtuberculosis；esat6-rpfDfusedgene；prokaryoticexpression；purification结核病(tuberculosis，TB)是由结核分枝杆菌(Mycobacterium1材料和方法tuberculosis，MTB)所致、以呼吸系统感染为主的慢性传染病，全球

8、有1／3的人口感染MTB，每年新发病例约1000万，每年约1．1材料300万人因TB死亡【”。卡介苗(BCG)接种是预防TB的主要手MTBH37Rv株、原核表达载体pProExHTB由本室保存；寡段，但对成