[精品]植物组织培养实验计划.doc

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1、植物组织培养实验计划实验目的：植物的组织培养实验原理：细胞的全能性实验用品：乙醉、酬喙乙酸（IAA）或2,4-D或蔡乙酸（AA）、氯化汞（升汞）或次氯酸钠、上节基氨基腺嚓吟（6-BA）、MS培养基、琼脂、0.1mol/LNaOH溶液、0.1mol/LHC1溶液、吐温20或80、洗衣粉「石炭酸、无菌采—实验器材：烧杯、电了秤、玻璃棒、药匙、胶头滴管、量筒、容最瓶、移液管、水浴锅、无菌操作台、100mL锥形瓶、封口膜、棉线、牛皮纸、恒温箱、培养室、喷壶、枪型银了、酒精灯、软刷、橡胶手套、口罩、剪刀、解剖刀、高压灭菌锅、手表、培养皿、无菌吸水纸、

2、采集袋、消毒毛巾实验过程：1、采集植物材料（要在晴天，最好是屮午或下午取材料，决不要在雨天、阴天或露水未干时取材料。因为健壮的植株和晴天光合呼吸吐盛的组织，有自身消毒作用，这种组织一般是无菌的。从外界或室内选取的植物材料，部不同程度地带有备种微生物。这些污染源一旦带人培养基，便会造成培养基污染。）除去不用的部分，将生长旺盛的部分仔细洗干净，用适当的刷了刷洗。把材料切割成适当大小（即灭菌容器能放人为宜）。流水冲洗20分钟左右，冲洗时间视材料清洁程度而宜。易漂浮或细小的材料，可装入纱布袋内冲洗。（流水冲洗在污染严重时特别有用。洗时可加入洗衣粉清洗

3、，然后再用白来水冲净洗衣粉水。最理想的清洗物质是表面活性物质一吐温）。2、配制MS培养基。成分分子昴使用浓度（mg/L）硝酸钾KN03101.211900硝酸钱NH4N0380.041650磷酸二氢.钾KII2P04136.09170硫酸镁MgSOd・71120246.47370氯化钙CaC12・21120147.02440碘化钾KI166.010.83硼酸II3B0361.836.2硫酸镒MnSOd・41120223.0122.3硫酸锌ZnS04・71120287.548.6钥酸钠Na2Mo04・21120241.950.25硫酸铜CuSO

4、d・51120249.680.025氯化钻CoC12・61120237.930.025乙二胺四乙酸二钠Na2.EIJTA372.2537.25硫酸亚铁FeS024・7II20278.0327.85肌醇一——100tt氨酸一2盐酸硫胺素VB1———0.1盐酸毗哆醉VB6—一0.5烟酸VB5或VPP—0.5蔗糖sucrose342.3130000琼脂agar—10000MS培养基屮还需要加入2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)、蔡乙酸(NAA)、6茉基H票吟(6BA)等植物生长调节物质，并且分别配成母液(0.1mg/mL)o其配制方法是：分别称取这

5、3种物质10mg,将2,4-D和NAA用少量(1mL)无水乙醇预溶,将6BA用少量(1mL)的物质的量浓度为0.1mol/L的NaOH溶液溶解,溶解过程需要水浴加热，最后分别定容至100mL,即得质量浓度为0.1mg/mL的母液。PS：组织培养是否能够获得成功，主要取决于对培养基的选择。组培用的培养基一般包括基础培养基和激素，但是植物激素的种类和数量，随着不同培养阶段和不同材料有变化。3、分装培养基。将配置好的培养基溶液煮开，调节pH至5.5-5.8,趁热分装于锥形瓶中，每个锥形瓶装入50mL4、准备消毒。用封口膜和棉线封好锥形瓶，并用牛皮纸

6、包好瓶口。将其他需要消毒的用品处理好，一并放入高压灭菌锅消毒。5、消毒。在外层锅内加适量的水，将需要灭菌的物品放入内层锅，盖好锅盖并对称地扭紧螺旋。加热使锅内产生蒸气,当压力表指针达到33.78kPa时,打开排气阀,将冷空气排出，此时压力表指针下降，当指针下降至零时，即将排气阀关好。继续加热，锅内蒸气增加，压力表指针又上升，当锅内压力增加到所需压力时，将火力减小，按所灭菌物品的特点，使蒸气压力维持所需压力一定时间，然后将灭菌器断电或断火,让其自然冷后再慢慢打开排气阀以扌非除余气,然后才能开盖取物注意：%1待灭菌的物品放置不宜过紧%1必须将冷空

7、气充分排除，否则锅内温度达不到规定温度，影响灭菌效果%1灭菌完毕后，不可放气减压，否则瓶内液体会剧烈沸腾，冲掉瓶塞而外溢甚至导致容器爆裂。须待灭菌器内压力降至与大气压相等后才可开盖6、对材料的表面浸润灭菌，用灭菌剂处理。(要在超净台或接种箱内完成)%1用70%酒精浸10〜30秒。由于酒精具有使植物材料表血被浸湿的作用，加Z70%酒精穿透力强，也很易杀伤植物细胞，所以浸润时间不能过长。有一些特殊的材料，如果实、花蕾、包有苞片、苞叶等的孕穗，多层鳞片的休眠芽等等，以及主要取用内部的材料，则可只川70%酒精处理稍长的时间。处理完的材料在无菌条件下，

8、待酒精蒸发示再剥除外层，取用内部材料。酒精渗透性强，幼嫩材料易在酒精屮失绿，所以浸泡时间要短，防止酒精杀死植物细胞。老熟材料，特别是种了等可以在酒精屮浸泡时问长一些