植物组织培养实验计划.doc

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1、植物组织培养实验计划实验目的：植物的组织培养实验原理：细胞的全能性实验用品：节基氨基腺瞟吟（6-BA）、溶液、O.lmol/LHCI实验器材：烧杯、电子秤、玻璃棒、药匙、胶头滴管、量筒、容量瓶、移液管、100mL实验过程：1、采集植物材料（要在晴天，最好是中午或下午取材料，决不要在雨天、阴天或露水未干吋取材料。因为健壮的植株和晴天光合呼吸旺盛的组织，有自身消毒作用，这种组织一般是无菌的。从外界或室内选取的植物材料，都不同程度地带冇各种微生物。这些污染源一旦带人培养基，便会造成培养基污染。）除去不用的部分

2、，将生长旺盛的部分仔细洗干净，用适当的刷子刷洗。把材料切割成适当大小（即灭菌容器能放人为宜）。流水冲洗20分钟左右，冲洗吋间视材料清洁程度而宜。易漂浮或细小的材料，可装入纱布袋内冲洗。（流水冲洗在污染严重时特别有用。洗时可加入洗衣粉清洗，然后再用自來水冲净洗衣粉水。最理想的清洗物质是表面活性物质一吐温）。过程需要水浴加热，最后分别定容至womL,即得质量浓度为0.1mg/mL的母液。PS：组织培养是否能够获得成功，主耍取决于対培养基的选择。组培用的培养基一般包括基础培养基和激素，但是植物激素的种类和数量

3、，随着不同培养阶段和不同材料有变化。3、分装培养基。将配置好的培养基溶液煮开，调节pH至5.5・5.&趁热分装于锥形瓶屮，每个锥形瓶装入50mL4、准备消毒。用封口膜和棉线封好锥形瓶，并用牛皮纸包好瓶口。将其他需要消毒的用品处理好，一并放入高压灭菌锅消毒。5、消毒。在外层锅内加适量的水，将需耍灭菌的物品放入内层锅，盖好锅盖并对称地扭紧螺旋。加热使锅内产生蒸气，当压力表指针达到33.78kPa时，打开排气阀，将冷空气排出，此时压力表指针下降，当指针下降至零时，即将排气阀关好。继续加热，锅内蒸气增加，压力表

4、指针又上升，当锅内压力增加到所需压力吋，将火力减小，按所灭菌物品的特点，使蒸气压力维持所需压力一定时间，然后将灭菌器断电或断火，让其自然冷后再慢慢打开排气阀以排除余气，然后才能开盖取物注意：%1待灭菌的物品放置不宜过紧%1必须将冷空气充分排除，否则锅内温度达不到规定温度，影响灭菌效果%1灭菌完毕后，不可放气减压，否则瓶内液体会剧烈沸腾，冲掉瓶塞而外溢甚至导致容器爆裂。须待灭菌器内压力降至与大气压相等后才可开盖6、对材料的表面浸润灭菌，用灭菌剂处理。（要在超净台或接种箱内完成）%1用70%酒精浸10-30

5、秒。由于酒精具有使植物材料表面被浸湿的作用，加之70%酒精穿透力强，也很易杀伤植物细胞，所以浸润吋间不能过长。有一些特殊的材料，如果实、花蕾、包有苞片、苞叶等的孕穗，多层鳞片的休眠芽等等，以及主要取用内部的材料，则可只用70%酒精处理稍长的时间。处理完的材料在无菌条件下，待酒精蒸发后再剥除外层，取用内部材料。酒精渗透性强，幼嫩材料易在酒精中失绿，所以浸泡时间要短，防止酒精杀死植物细胞。老熟材料，特别是种子等可以在酒精中浸泡时间长一些，如种子可以浸泡5分钟。%1用升汞浸泡10分钟左右。升汞的渗透力弱，对植

6、物材料的杀伤力不大。%1用漂白粉浸10-30秒。漂白粉容易导致植物材料失绿，所以对于幼嫩材料要慎用。PS：在消毒液屮加入浓度为0.08—0.12%的吐温20或80,可以降低植物材料表面的张力，达到更好的消毒效果。7、用无菌水涮洗。（要在超净台或接种箱内完成）涮洗要每次3min左右，视采用的消毒液种类，涮洗3・10次左右，免除消毒剂杀伤植物细胞的副作用。再用无菌吸水纸吸干其表面。8、接种。（无菌操作台屮进行）接种前用体积分数为70%的酒精擦拭工作台，在操作台内外喷洒石炭酸，打开紫外线灯消毒。工作台消毒后,

7、首先点燃酒精灯。此后所有的接种工作都必须在酒精灯旁进行，并且每次使用器械后，都需要有火焰灼烧灭菌。每次接种，用石炭酸喷洒双手。将装有培养基的锥形瓶整齐地排列在酒精灯左侧。将消毒过的植物组织在无菌培养皿屮切成小段。左手持锥形瓶，右手拉开捆扎锥形瓶的绳子，并将封口膜攥于右手手心,以避免封口膜接触瓶口的一面被污染。左手持瓶,使瓶口旋转通过火焰，右手用银子夹取植物组织，插入培养基。（应注意方向，不能倒插）接种后加封口膜重新扎好。9、培养。温度控制在18-22°C,每天光照12小时。10、每天观察记录组织培养程度

8、。