[精品]植物组织培养实验指导.doc

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1、生物技术大实验第一部分植物组织培养实验一、母液的配制和保存（3学时）一、实验目的通过配制MS培养基母液，掌握贮备液的配制和保存方法。二、原理配制培养基时，为了使用方便和用量准确，通常采用母液法进行配制，即按培养基配方中各试剂的用量，扩大若干倍后再准确称量，分别先配制成一系列的母液置于冰箱中保存。使用时按比例吸取母液进行稀释配制即可。以MS培养基为例，所需配制的母液为：大量元素母液（母液I,浓缩10倍）、微量元素母液（母液II,浓缩100倍）、铁盐母液（母液III,浓缩100倍）和有机化合物母液（母液IV,浓缩10（）倍）等。三、实验仪器设备和试剂冰箱,天平,酸度计,烧杯（50ml

2、,100ml,500ml,1000ml）,量筒（1000ml,100ml,25ml）,容量瓶（1000ml,500ml,100ml）,磨口试剂瓶（100ml,500ml,1000ml）,药勺、称量纸、滴管、玻璃棒，电炉，微波炉NH4NO3,MnSO4.4H2O,KNO3,ZnSO4.7H2O,CaCl2.2H2O,Na2MoO4.2H2O,MgSO4.7H2O,CuSO4.5H2O,KH2PO4,CoC12.6H2O,H2BO3,Na2«EDTA・2H2O,KI,FeSO4.7H2O,烟酸，甘氨酸，盐酸硫胺素，肌醇，盐酸肛哆权蒸馆水四、实验方法1、MS大量元素母液的配制配制时先用

3、最筒最取蒸Y留水大约350ml,放入500ml的烧杯屮，按照配方表屮用量依次分别称取：NH4NO3,KNC）3,KHoPO4,MgSO4.7H2O,CaCl2.2HoO,待第一种化合物溶解后再加入第二种化合物，当最后一种化合物完全溶解后，将溶液倒入500ml的容量瓶屮，用蒸锢水定容至500ml,然后,倒入细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称、配制口期、配制人姓名，置于4°C冰箱屮保存备用。2、MS微量元素母液的配制按照配方表屮用量用电了天平分别依次称取MnSO4-4H2O,ZnSO4

4、蒸镉水逐个溶解，待全部溶舖后，用容量瓶定容,装入500ml细口试剂瓶屮，贴上标签，注曲母液名称、配制LI期、配制人姓名，置于4°C冰箱中保存备用。3、MS铁盐母液配制把FeSO4*7H2O和N“2・EDTA・2H?O分别置于200ml蒸馆水屮，加热并不断搅拌使之溶解。保持加热，把FeSO4溶液慢慢倒入Na2-EDTA溶液屮并不断搅拌，接近沸腾时停止加热，待溶液冷却后把pH值调到5.5,加蒸憾水到最终容积500ml,置于棕色细口瓶中,用力振荡1〜2min,贴上标签,注明母液名称、放大倍数、配制口期、配制人姓名。在室温下避光保存一段时间令其充分反应后，再置于4°C冰箱屮保存备用。4、

5、MS有机化合物母液的配制按配方表屮用量依次称取：肌醉，维生素B”烟酸，林氨酸，维生索B6,用蒸馄水依次溶解并定容后，转入500ml细口试剂瓶屮，贴上标签，注明母液名称、配制口期、配制人姓名，置于4°C冰箱屮保存备用。5、植物生长物质母液的配制NAA母液：配制浓度为O.lmg/mloNAA属于生长索类激索。6・BA母液：配制浓度为O.lmg/mU6-BA属于细胞分裂索。五、实验报告1、撰写实验报告。（包括实验名称、目的、原理、实验用品、实验操作内容，实验结果，数据记录与处理、分析和讨论）2、思考题(必做)(DMS培养基母液配方及其母液的配制成分规定用量(mg/L)成分规定用量(mg

6、/L)母液I(大量元素)扩大10倍配置1L所需量母液II(微量元素)扩大100倍配置500ml所需量NH4NO31650MnSO4・4H?O22.3kno31900ZnSO4*7H2O8.6KH2PO4170H2BO36.2MgSO4*7H2O370KI0.83CaCL2*2H2O440Na-MoO4*2H2O0.25母液IV(冇机物)扩大1()()倍配置5()()ml所需量CuSO4*5H2O().025扩大100倍配置500ml所需量肌醇100CoCI2*6H2O0.025烟酸0.5维生素$0」母液川(铁盐)甘氨酸2FeSO4*7H2O37.3维生素B6().5Na2*EDT

7、A*2H2O27.8⑵植物生长物质母液的配制:植物生长物质名称母液浓度配制100ml所需称取的量XAA0.lmg/ml6-BAlmg/ml实验二、培养基的配制与灭菌（3学时）一、实验目的学习用母液法配制培养基以及掌握培养基火菌的方法。二、原理纽•织培养所川的培养基含有植物细胞生长所必需的各类营养物质，同时也是微生物繁殖的极好场所，因此必需对培养基进行灭菌处理，以确保无菌操作的顺利进行。三、实验仪器设备和试剂天平,烧杯（50ml,100ml,500ml,1000ml）,量筒（100