植物组织培养实验及实习指导.doc

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1、植物组织培养卖验及卖习指导杨玲编西尚林学院生物技术教研室目录实验一、母液的配制和保存2实验二、培养基的配制与灭菌5实验三、外植体消毒与初代培养的建立7实验四、继代与增殖培养9实验五、生根培养11实验六、植物茎尖脱毒培养13实习、试管苗的炼苗与移栽15实验一、母液的配制和保存一、实验目的通过配制MS培养基母液，掌握贮备液的配制和保存方法。二、原理配制培养基时，为了使用方便和用量准确，通常采用母液法进行配制，即按培养基配方中各试剂的用量，扩大若干倍后再准确称量，分别先配制成一系列的母液置于冰箱中保存。使用时按比例吸取母液进行稀释配制即可。以MS培养基为例，所需配制的母液为：大量元素母液

2、（母液I,浓缩20倍）、微量元素母液（母液II,浓缩200倍）、铁盐母液（母液III,浓缩200倍）和有机化合物母液（母液IV,浓缩200倍）等。三、实验材料、试剂和仪器设备1•试剂NH4NO3,KNO3,CaCL・2H20,MgSO,-7^0,KH2PObKI,H2BO3,MnSOi・4出0,ZnSO，（・7H20,Na2・Mo0r2比0,CuS04-5H.0,CoCl2-6IbO,Na2-EDTA*2H2O,FeS04・7II?0,烟酸，甘氨酸，盐酸硫胺素，肌醇，盐酸毗哆醇，蒸僧水2.仪器设备冰箱，天平，酸度计或pH试纸,烧杯（50ml,100ml,500ml,1000ml）,

3、量筒（1000ml,100ml,25ml）,容量瓶（1000ml,500ml,100ml）,磨口试剂瓶（500ml,1000ml）,药勺、称量纸、酸度计或pH试纸，滴管、玻璃棒，电炉，微波炉四、实验方法1.大量元素母液的配制配制时先用量筒量取蒸饰水大约800ml,放入1000ml的烧杯屮，按照配方表中用量依次分别称取：NHiNOs,KNO3,KHzPOt,MgSO..7H20,CaCl2.2H20,待第一种化合物溶解后再加入第二种化合物，当最后一种化合物完全溶解后，将溶液倒入1000ml的容量瓶屮，用蒸饰水定容至1000ml,然后，倒入细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称、放大倍数

4、、配制日期、配制人姓名，置于4°C冰箱中保存备用。1.微量元素母液的配制按照配方表中用量用电子天平分别依次称取MnSOi・4比0,ZnSOr7H2O,H2BO3,KI,NaMo0!-2H20,CuSOWhO,C0CU6H2O,按制备母液I的方法逐个溶解。（钳酸钠难溶解，可在室温下用蒸谓水溶解后再加入到微量元素母液中。）定容至1000ml,转入细口试剂瓶中,贴上标签，注明母液名称、放大倍数、配制日期、配制人姓名，置于4°C冰箱中保存备用。2.铁盐母液配制把FeSO»*7H2O和陆叱0'皿・2比0分别置于450ml蒸係水屮，加热并不断搅拌使Z溶解。保持加热，把FeSOi溶液慢慢倒入Na

5、2-EDTA溶液中并不断搅拌，接近沸腾时停止加热，待溶液冷却后把pH值调到5.5,加蒸馄水到最终容积1000ml,置于棕色细口瓶中,用力振荡1〜2ndn,贴上标签，注明母液名称、放大倍数、配制日期、配制人姓名。在室温下避光保存一段时间令其充分反应后，再置于4°C冰箱中保存备用。3.有机化合物母液的配制按配方表中用量依次称取：维生素b,烟酸，甘氨酸，维生素％,用蒸镉水依次溶解并定容后，装入1000ml细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称、放大倍数、配制日期、配制人姓名，置于4°C冰箱屮保存备用。4.植物生长物质母液的配制NAA母液：准确称量lOmg,先用少fiImol/LNaOH溶液

6、完全溶解后，加蒸他水定容至100ml,即配制成浓度为0.lmg/ml的NAA母液，转入细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称、浓度、配制口期、配制人姓名，置于4°C冰箱中保存备用。6-BA母液的配制力法相似，母液浓度为加g/ml。请注意细胞分裂素的溶解方法。五、实验报告按照实验报告格式要求及各组在实验屮的配制溶液情况，完成报告撰写。附：MS培养基母液配方成分数量(mg/L)成分数量(mg/L)母液I母液IINHiNOb33000MnSOi*4H204460KNO338000ZnS0i*7H201720KH2PO.13400h,bo31240MgSOl*7H2O7400KI166CaC

7、L2・2出08800Na•M0CV2H2O50母液IVCuSO4*5H2O5肌醇20000C0CL6H2O5烟酸100维生素Bi100母液III廿氨酸400FeS0i*7H205560维生素Bo100Na2*EDTA*2H207460实验二、培养基的配制与灭菌一、实验目的学习用母液法配制培养基以及掌握培养基灭菌的方法。二、原理组织培养所用的培养基含有植物细胞生长所必需的各类营养物质，同时也是微牛物繁殖的极好场所，因此必需对培养基进行灭菌处理，以确保无菌操作的顺利进行。