植物组织培养技术实验指导书

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1、《植物组织培养技术》实验教学准备工作一、配制母液所需药品、器材1、Ms成分19种（N6同）2、蔗糖3、琼脂4、激素（NAA、6-BA、IBA、IAA、KT、ZT等）电子天平、（试管）、容量瓶、烧杯、称量瓶、吸水纸、介匙、母液瓶（棕色）、蒸憾水二、无菌室所需物品1、95%洒精、70%酒精、新洁尔灭、甲醛、高猛酸钾、紫外灯、工业酒精2、枪式银子（16cm,20cm）、尖银（16cm）、解剖刀、柄、接种针、手术剪、喷雾器、药棉、纱布、火柴・3、广口瓶若干、酒精灯、漏斗、无菌培养皿三、学牛配制培养基、分装、高压灭菌所需器具1、培养瓶（PP,120ml三角瓶）（15mm*145mm试

2、管）2、电炉3、烧杯（1000ml）移液管（10ml、5ml、2ml、1ml）、吸4、量筒（100ml、50ml）、角匙、天平、剪刀、吸水、纸5、pH值精密试纸（5.4-7）6、氢氧化钠、盐酸（1N）、蒸憎水、牛皮纸、棉绳7、试剂瓶、（激素、酸碱）、滴管、标签、玻棒四、消毒剂（处理外植体）升汞（氯化汞）、酒精、漂口粉、双氧水、次氯酸钠实验一、Ms培养基的配制、分装和灭菌植物组织培养的成功与否，除培养材料本身的因素外，第一•个因素就是培养基。应根据培养植物的种类和部位，选择适宜的培养基。另外植物组织培养是在无菌条件下培养植物的技术。要达到无菌操作和无菌培养，必须有一定的无菌环

3、境（高压灭菌，无菌室，超净工作台等），使用无菌的容器和用具，进行无菌操作，使培养的植物材料在一定的温度、湿度、光照、营养条件下，生长、发育和繁殖。一、目的要求学习常用培养基母液的配制方法、培养基的分装和灭菌技术二、实验用品1、仪器・高压灭菌锅、天平、电炉2、玻璃器皿・烧杯、量筒、移液管、、玻棒、吸球、培养瓶、培养皿、500ml三角瓶、角匙、吸水纸3、药品与试剂・Ms母液（见表1-1）氢氧化钠1N、盐酸1N、蔗糖、琼脂、2,4-D（lmg/ml）.NAA(lmg/ml)>蒸憾水三、实验方法（一）、培养基的配制配制培养基前要先配制母液。母液分大量元素、微量元素、铁盐及有机物质四

4、大类。（用量详见表l-l）o1、大量元素母液（20倍液）分别称取20倍用量的各种人量无机盐，要一种药品完全溶解后加入下一个药品，依次溶解于约600ml热的（50°C）蒸憾水中。（CaC12.2H20）另外溶解后与前溶解的药品，加水定容至1000ml装入试剂瓶中，冰箱内贮存备用。2、微量元素母液（100倍）附表1-1MS培养基母液的配制（单位：mg）类别成分培养基浓度（mg/L）1升母液称取量（mg）母液体积（ml）母液扩人倍数每升培养基取母液的量（ml）大CaC12.2II204408800100020倍50量■•兀无水(CaC12)3326640索KNO319003800

5、01MgS04.7H203707400NII4.N03165033000KH2P041703400微量元素9MnS04.4H20ZnS04.7H20H3BO3KTNa2Mo04.21120CuS04.5H20CoC12.6H2O22.3&66.20.830.250.0250.025223086062083252.52.51000100倍10铁盐3Na2.EDTAFeSO4.7H2O37.2527.85372527851000100倍10冇机物4甘氨酸盐酸硫胺素盐酸毗哆素烟酸肌醇2455100100202525500050050倍10分别称取100倍用量的微量无机盐，依次溶解

6、于约600ml重蒸水11',加水定容至1000mlo冰箱内贮存备用3、铁盐母液（100倍）称取100倍用量的Na2・EDTA（乙二胺四乙酸钠）、FeS04・7巴0溶于600ml重蒸水中，加水定容至1000ml。冰箱内贮存备用。4、有机物质母液（50倍）分别称取50倍用量的各种有机物质，依次溶解于400ml重蒸水中，定容至500ml；装入棕色瓶中贮存于冰箱里。5、生长素如2,4-D、IAA、NAA等。准确称取20mg,先用2ml95%乙醇溶解，然后加水，定容至20ml,浓度为lmg/ml,放入水箱备用。6、细胞分裂素如激动素（Kt）、6-节基卩票吟（6-BA）o准确称取20m

7、g先用2nd的lmol/LHCl或NaOH溶解,然后加水，定容至20ml,浓度为lmg/ml,放入水箱备用。二、培养基的配制与分装取1000ml烧杯一只，加大量元素母液(1)50ml,微量元素母液(2)10ml,铁盐母液(3)10ml,有机物质母液(4)10ml。此外，还需添加2,4-D2ml/L、NAAlml/L.蔗糖30g/L等、然后加水至1000ml，待蔗糖充分溶解后用lmol/LHC1或NaOH调整PH5.8,最后加入琼脂粉4-4.5g/L或琼脂条7-10g/L加热至琼脂完全融化。趁热分装到培养瓶中，每瓶约