植物组织培养实验指导书

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1、《植物组织培养实验指导》的相关说明实验一　　实验室基本设备及其用途的识别一、目的认识植物组织培养实验室的基本结构，必须的基本设备及其用途与作用方法。二、实验内容1．实验室的基本结构（二）化学实验室（工作室）培养基药品称量、配制、分装、灭菌；材料预处理；培养材料的观察分析；制蒸馏水。设备、药柜、工作台、蒸馏水器、天平、冰箱，手提高压消毒锅、显微镜、解剖镜、各种玻璃仪器、金属仪器等。安装水、电、排气等装置。（三）接种室①无菌操作室②接种箱③超净工作台（四）培养室（五）洗涤、消毒室；卧式高压消毒锅。（六）温室（培养大棚）。　　　　　　　　　

2、　　　　　　　　　　　　19实验二　　常用仪器、必要器皿、几种主要设备的使用方法、常用几种药剂的配制一、目的认识植物组织培养必需的仪器、器皿，几种主要设备的使用方法、常用几种药剂的配制。二、常用仪器1.蒸馏水器（学习操作）2.手提式高压消毒锅、卧式高压消毒锅（学习使用、操作）3.天平⑴　药物天平（工业天平）、粗天平、（精密度1/10）⑵　扭力天平（精密度1/100）⑶　分析天平（精密度1/10000）4.超净工作台（学习、使用、操作）5.电热干燥箱（烘箱）6.恒温光照培养箱（学习、操作）7.电冰箱8.显微镜和解剖镜①手提式解剖镜（学习

3、、使用、操作）②立体解剖镜③普通显微镜9.旋转培养机10.离心机（学习、使用、操作）11.酸度测定仪：⑴精密PH4－7试纸；⑵笔型　袖珍酸度计。三、必要的器皿（一）玻璃器皿1.　培养器皿①试管②三角烧瓶（锥形瓶）③圆形高形培养瓶（罐头瓶）④培养皿⑤扁身培养瓶⑥L型和T型管⑦凹面载玻片2.　盛装器皿①试剂瓶②烧杯3.　计量器皿①量筒②容量瓶③吸管4.　其它器皿　滴瓶、称量瓶、漏斗、玻璃管、注射器等实验室常用器皿。（二）金属器械　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　191.　镊子类①20－25cm长型镊子（接种或转移愈伤组织）②尖端弯

4、曲“枪型”镊子（镊取较小的植物组织）③尖头钟表镊子和鸭嘴镊子（剥离表皮用）④尖端为小铲状镊子（挖取带琼脂培养基的培养物）2.　解剖刀和刀类①眼科用刀种牛痘疫苗的菱形刀（切割柔软组织中小细胞团）②解剖刀（手术刀）③双面刀片焊接在玻棒上（切取茎尖用）④锋利小刀、大刀和小铁锹3.　剪刀类①　解剖剪　　②　眉剪　　③　眼科剪　　④18－25cm弯头剪　　⑤　俢枝剪　4.接种针四、几种常用药剂的配制（一）用95%尝试酒精配比不同浓度的酒精的配制。学习配制70%和75%酒精。（二）消毒剂1.　20%次氯酸钠溶液　　称取20g次氯酸钠用少许水溶解，

5、100ml水定容。2.　0.1%升汞（HgCl2）溶液　　称取0.1gHgCl2少许水溶解，100ml水定容。（三）洗涤剂1.　2HCl酒精　　95%酒精100ml加入2mlHCl2.　硫酸－重铬酸钾洗液　称取10g重铬酸钾加入蒸馏水90ml，加热溶解冷却后，逐渐加入浓硫酸175ml，放入棕色玻璃瓶备用，（注意：切记不可将盛过洒精，甲醛等原剂的药品玻璃器皿直接泡入洗液在，因为重铬酸钾是一种强的氧化剂，一旦被还原氧化，洗液变绿，失去洗涤作用）。这些器皿必须用自来水冲洗干净并晾干再浸入洗液。（四）1摩尔浓度(mg/L)NaOH和1摩尔浓度

6、（mg/L）HCl配制。摩尔浓度是指用1升（1000ml）溶液中所含溶质的分子量数来表示的溶液的浓度。用M表示。1.　NaOH摩尔浓度（M）NaOH摩尔质量=分子克数=40g1MNaOH是指1000ml溶液中含有40克摩尔质量的NaOH，现要配制100ml40×0.1＝4g称取NaOH4g，用少量溶解，定容100ml.2.　HCl的摩尔浓度具体配制酸的mol浓度时，应考虑原浓酸的比重mol浓度。　　要求配制的mol浓度×需配制的体积×原酸分子量V＝———————————————————————　　原酸的百分浓度×原酸的比重×1000配

7、制1.0M　HCl　100ml，量取38%，比重为1.19的HCl8.06ml加蒸馏水，定容至100ml。　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　19实验三　　洗涤――灭菌植物组织培养能否成功重要的一环是在无菌条件下进行操作与培养，导致污染的来源主要有：⑴　器皿和用具；⑵　培养基；⑶　培养材料；⑷　工作人员本身；⑸　操作时的空气。防止污染的有效方法是将所有与培养有关的器皿，用具、培养基、接种室、培养室等进行灭菌和无菌操作。一、洗涤（一）玻璃器皿的洗涤1.　新购置的玻璃器皿的洗涤（学习、操作）因有游离碱性物质，使用前先用1%稀盐酸浸泡

8、一夜，然后用肥皂水洗净，清水冲洗，最后用蒸馏水冲洗一次，干后备用。2.　已用过玻璃器皿先将残渣除去；用清水洗净，再用热肥皂水或洗衣粉洗净，清水冲洗干净，最后用蒸馏水冲洗一次，干后备用。3.　对一些不宜刷洗的玻璃器皿如：吸