植物组织培养实验(新)

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1、植物组织培养陈　　勇一、培养基的成分及作用二、培养基的制备概念：本世纪初开始，以植物生理学为基础发展起来的一项技术。即应用无菌操作方法，培养植物的一个离体器官、组织或细胞。这项技术已在快速繁殖、去除病毒、加速育种进程、次生代谢产物生产和种质资源的保存等方面取得了巨大的经济效益、社会效益及生态效益。根芽形成的激素控制理论：细胞分裂素与生长素的比例与绝对含量，调控着植物组织的形态发生及细胞分化，当比值高时产生芽，低时产生根，比值适中时可能维持原组织生长而不分化。植物组织培养的优点1.研究材料来源单一，无性系遗传背景一致2.经济方便效率高3.条件可控误差

2、小4.生长快周期短重复性强5.周年试验或生产组织培养的几道主要工序：培养器皿的清洗；培养基的配置、分装、包扎和高压灭菌；无菌操作——材料的表面灭菌和接种；放入培养室培养；试管苗的种植与初期管理。操作技术1.洗涤培养过程中最经常最大量的工作之一，是洗涤培养瓶及其它常用器皿。最常用的洗涤助剂就是家庭用的洗衣粉及肥皂。2.灭菌有菌的范畴：凡是暴露在空气中的物体，曾经接触过自然水源的物体，至少它的表面，毫无例外都是有菌的。无菌的范畴：经过高温灼烧或蒸煮过后的物体，经其他物理的或化学灭菌方法处理过后的物体，是无菌的。常用的灭菌方法可分为物理方法和化学方法两大

3、类。（1）培养基的灭菌：常规方法是放入高压灭菌锅内加热加压灭菌。一般少量的液体只要121℃即每平方厘米1.1kg的压力20分钟就能达到彻底灭菌。灭菌的功效主要是靠温度，而不是压力。高压灭菌锅的使用可选用以下任一种：A.打开放气阀，煮沸15分钟后再关闭；B打开放气阀煮沸至大量热蒸汽喷出再关闭；C先关闭放气阀，待压力上升到0.5kg/cm2以上时，打开放气阀放出空气，再关闭。（2）不耐热的物质将采用过滤灭菌如赤霉素、玉米素、脱落酸、尿素和某些维生素等。过滤灭菌的原理：溶液通过滤膜后，细菌的细胞和孢子等因大于滤膜孔径而被阻。（3）玻璃器皿及耐热用具等可采

4、用干热灭菌即利用烘箱加热到160-180℃的温度来杀灭微生物。（4）用于无菌操作的器械采用灼烧灭菌（5）布制品采用高压灭菌（6）其它二、培养基的成分及作用完善的培养基配方：包括大量元素、微量元素、铁盐溶液、碳源、有机附加成分、植物激素、琼脂等。配置中注意8个字：大、微、铁、有、糖、琼、激、PH。（一）大量元素植物所需元素，浓度大于0.5mmol/l的应属于大量元素，而小于0.5mmol/l的则属于微量元素。植物必需的元素在体内的生理作用有四方面（P49）。MS培养基的特点：含有很高量的氮、钾，尤其硝酸盐的用量很大，还含有一定数量的铵盐。（二）微量元

5、素植物所需的微量元素至少包括铁、硼、锰、锌、钼、铜、钴和氯。微量元素的生理作用主要在酶的催化功能和细胞分化、维持细胞的完整机能等方面。（三）铁盐现在培养基中几乎都采用Fe·EDTA形态的铁盐。铁促进细胞分裂与伸长，还影响到叶绿体的结构组成与叶绿素形成。（四）有机成分植物组织需要的一些维生素、氨基酸、肌醇，统称为有机附加成分。维生素有维生素B1（硫胺素）、维生素B6（吡哆醇）、维生素B3或维生素PP（烟酸）、维生素B5（泛酸钙）等氨基酸中最常用的是甘氨酸。（五）糖作用：碳源、碳骨架、提供底物与能源、维持一定的渗透势。常用的碳源是蔗糖，浓度为2—5%。

6、（六）琼脂琼脂是最好的固化剂，本身并不提供任何营养。用量一般在4-10g/l之间。（七）植物激素植物激素是植物新陈代谢中产生的天然化合物，它能以极微小的量影响到植物的细胞分化、分裂、发育，影响到植物的形态建成、开花、结实、成熟、脱落、衰老和休眠、萌发等许许多多的生理生化活动。常用种类有：1.生长素类：生理作用（P61），主要有吲哚乙酸（IAA）、萘乙酸（NAA）、吲哚丁酸（IBA）、2，4-D等。脱分化：使已分化了的停止分裂的细胞失去分化特性，回复到未分化的幼龄状态，恢复细胞分裂的能力。分化阶段：使脱分化形成的处于幼龄状态的细胞团或组织，再产生根、

7、芽、胚状体等有高层次组织结构的特化细胞。2细胞分裂素生理作用：（P63）种类有苄基腺嘌呤（6-BA）、糠基腺嘌（激动素）等。3赤霉素（GA）生理作用：（P67）4脱落酸（ABA）生理作用：（P68）5乙烯生理作用：（P69）（八）PH值PH值即酸碱度培养的植物材料大多数要求弱酸性的环境，一般用1N的KOH或NaOH调整到PH5.6-5.8的范围内。（九）其它成分较常见的有活性炭、抗生素、抗氧化剂、诱变剂、生长抑制剂、促进细胞分裂和胚状体同步发生的药剂等。植物组织培养Ⅰ——培养基的制备（一）储备液的配置与保存将配方中的药品一次称量供一段时间使用，即配

8、一些浓溶液，用时稀释，这种浓溶液就是储备液或母液。一般大量元素比使用液浓度高10-100倍，微量元素等可高200-1000