实验六、植物组织培养

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1、对照NaCl冰水植物组织培养实验六一、配制培养基二、无菌操作三、无菌培养四、观察记录※上交实验报告时间：第16周实验安排下周（第11周）本周（第10周）第12、13、14、15周每周进行观察（1）深刻理解植物组织培养的基本概念和理论依据。（2）训练利用实验室的条件来合理设计和完成实验的基本技能。实验目的植物组织培养就是将植物离体的生活部分（如器官、组织、细胞甚至原生质体等）通过无菌操作接种在适宜的培养基上，在人工控制的条件（如温度、光照、湿度等）下进行培养的技术。理论依据：植物细胞的全能性。植物体的每一个细胞都携带着一

2、套完整的基因组，并具有发育成完整植株的潜在能力。实验原理外植体接种完整植株脱分化再分化外植体愈伤组织芽、根实验设计的依据依据一分化植物组织培养的过程接种脱分化再分化愈伤组织外植体再分化冲洗表面消毒培养基中植物生长物质的种类和浓度在脱分化和再分化中起重要作用，尤其是生长素和细胞分裂素类的比例。实验设计的依据依据二生长素类/细胞分裂素类高诱导根的分化中愈伤组织生长不分化低诱导芽的分化①MS培养基的大量元素；②MS培养基的微量元素；③MS培养基的铁盐；④有机附加成分；⑤NAA、6-BA；⑥蔗糖、冷凝脂；⑦0.1mol/LNa

3、OH和0.1mol/LHCl。条件一：实验药品实验条件A无机营养(包括植物必需的大量和微量元素，均以盐的形式加入)B碳源(一般为蔗糖，浓度30g/L左右)，作用是提供营养和维持渗透平衡。C有机附加物(主要有氨基酸、水解酪蛋白；VB1、VB6、烟酸（VB3）和肌醇，等)D植物生长物质(生长素类和细胞分裂素类等)培养基的成分肌醇：有助于活性物质发挥作用，提高VB1的效果。分子量较大和其他在一起不好溶解。单独配制。氨基酸：有机氮源有机物质：提供必须的微量营养成分、生理活性物质。条件二：实验仪器及设备①烧杯、移液器、量筒、精密

4、电子天平、三角瓶、pH试纸、封口膜等；②高压灭菌锅；③无菌操作间、超净工作台；④能够控制光照和温度条件的培养室。实验条件要求以菊花无菌苗为材料进行以下培养基的设计。（1）诱导菊花无菌苗叶片形成愈伤组织（2）诱导菊花无菌苗茎段形成芽实验设计菊花无菌苗实验材料具体做法全班分为成小组，根据设计要求结合实验原理、设计依据及已提供的实验条件，在查阅资料的基础上，合理设计实验（主要对培养基进行设计）。设计出初步方案后，每组推选一名代表向全班汇报设计的原理、方案和预期的结果；再经全班讨论确定最后的设计方案。全班分成6个小组，按照要求

5、经查阅资料、代表汇报和全班讨论，最后确定设计的培养基如下（MS为基本培养基）：1.诱导菊花无菌苗叶片形成愈伤组织（1）MS+6-BA0.2+NAA0（6-BA占优势）（2）MS+6-BA0.2+NAA0.15（NAA增加浓度）（3）MS+6-BA0.2+NAA0.2（二者比例适中）2.诱导菊花无菌苗茎段形成芽（4）MS+6-BA0+NAA1.0（NAA占优势）（5）MS+6-BA0.5+NAA1.0（6-BA增加浓度）（6）MS+6-BA1.5+NAA1.0（6-BA占优势）根据设计的培养基，利用提供的实验条件，我们将

6、按照下列步骤完成实验。接种脱分化再分化愈伤组织外植体再分化冲洗表面消毒怀菊花无菌体系无菌苗叶片诱导产生愈伤带芽茎段诱导产生芽一、配制培养基二、无菌操作三、无菌培养四、观察记录实验步骤一、配制培养基1.配制母液实验步骤①MS培养基的大量元素母液（20×）；②MS培养基的微量元素母液（100×）；③有机附加成分母液（100×）；④肌醇母液（100×）；⑤MS培养基的铁盐母液（200×）；⑥6-BA、NAA母液(0.5mg/mL)。2.配制培养基各个小组根据自己的设计方案进行。要求：每一种培养基500mL，分装12瓶，每瓶4

7、0mL，每瓶做好标记，如：1，2，……。（1）加溶液。顺序为：大量元素→微量元素→附加成分→肌醇→铁盐→植物生长调节剂→蔗糖→冷凝脂（2）搅拌混匀;（3）定容至500mL；（4）调pH值至5.6~5.8；（5）分装、封口。3.培养基灭菌高压灭菌(压力1.1kg/cm2,121℃,20min)。湿热灭菌各物质加入量：①大量元素母液（20×）50mL/L；②微量元素母液（100×）10mL/L；③有机附加成分母液（100×）10mL/L；④蔗糖(30g/L)、冷凝脂(5.8g/L)⑤肌醇母液（100×）10mL/L；⑥铁盐

8、母液（200×）5mL/L；⑦6-BA、NAA母液(0.5mg/mL)共500mL,分装12瓶大量元素25mL微量元素5mL有机物5mL肌醇5mL铁盐2.5mL蔗糖15g冷凝脂2.9g6-BA0mLNAA1mL调PH值分装封口标记灭菌编号培养基组成（mg/L）各物质加入量（mL/500mL）6-BANAA1MS+6-BA0.2+N