植物组织培养实验教案

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1、实习二营养培养基配制一、培养基母液配制为了减少工作量，减少多次称量所造成的误差，一般将常用药品配成比所需浓度高10—100倍的母液，现以MS培养基为例，预先配制，四组不同母液，说明母液的配制方法。MS培养基母液配制（单位：毫克　mg）注意：1．大量元素按照使用时高10倍的数值称取，分别将各种化合物称量后，除CaCl2·2H2O单独配制外，其余化合物混合在500ml烧杯中加适量蒸馏水溶解，用玻璃棒搅拌促溶，倒入1000ml容量瓶中用蒸馏水定容至刻度，置小口瓶中保存，贴上标签注明化合物名称（或编号），浓缩倍数，配制日期和配制者姓名，CaCl2·2H2O配制同上置于另一小口瓶

2、中。2．微量元素母液按要求浓缩100倍的数值称取，分别将各种化合物称量除铁盐（FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O）作为一组单独配制外，其余化合物分别置于烧杯内加少量蒸馏水溶解后，混合定容在1000ml容量瓶中，置小口瓶中保存，贴上标签。3．铁盐配制将FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O分别溶于450ml蒸馏水中加热，不断搅拌，溶解后两液混合，调PH5.5加水定容至1000ml，置于小口瓶中，贴上标签。4．有机物母液配制，按母液要求浓缩50倍，除蔗糖按3%单独临时称量外，其余分别称量后，溶解，定容在500ml容量瓶中，置于小口瓶中保存，贴上标签。

3、5．母液最好在2~4℃的冰箱中贮存，特别是有机类物质，贮存时间不宜过长，无机盐母液最好在一个月内用完，如发现有霉菌和沉淀产生，就不能再使用。6.制备母液和营养培养基时，所用蒸馏水或无离子水必须符合标准要求，化学药品必须是高纯度的（分析纯）。7.称量药物采用高灵敏度的天平，每种药品专用一药匙。11母液成　分规定量浓缩倍数称取量母液体积配制1升培养基吸取量定容编号种类I大量元素KNO3190010190001000100NH4NO316501016500MgSO4·7H2O370103700KH2PO4170101700CaCl2·2H2O440104400II微量元素Mn

4、SO4·4H2O22.3100223010010ZnSO4·7H2O8.6100860H3BO36.2100620KI0.8310083Na2MoO4·7H2O0.2510025CuSO4.5H2O40.0251002.5CoCL2.6H2O0.0251002.5铁盐Na2-EDTA37.31003730100010FeSO4.4H2O27.81002780III有机物甘氨酸2.05010050010盐酸吡哆醇0.55025盐酸硫铵素0.1505烟酸0.5502511肌酸100505000二、养培养基配制程序(一)母液吸取量的计算配制培养基的升数公式1：母液吸取量=母液

5、体积×——————————母液浓缩倍数培养基要求的含量公式2：母液吸取量=———————————（各种生长调节剂）母液每CC的含量（二）各种母液按顺序编号排列A.大量元素；B.CaCl2.2H2O；C.微量元素；D.铁盐；E.有机物；F．生长素萘乙酸（NAA）：配制0.5mg/ml的NAA称取50mg，NAA用少量95%酒精溶解后加蒸馏水定容至1000ml；G.细胞分裂素、激动素（KT）配制0.5mg/ml的KT称50mgKT用少量1NHCL溶解后,加蒸馏水定容至100ml。(三)　配制培养基1.称取5-7g琼脂，30g蔗糖加入300ml蒸馏水，加热溶解直至完全溶解为止

6、.2.各种母液的吸取用50ml量筒量取大量元素母液（A）和CaCl2·2H2O母液（B）各100ml分别用10ml移液管或吸管吸取微量元素（C），铁盐（D）母液各10ml用10ml移液管或吸管吸取有机物（H）10ml用2ml移液管吸取生长素NAA1.5ml；用0.5ml移液管吸取KT0.5ml　将上述溶液全部混合于琼脂与蔗糖溶液中，混合均匀后，加热至80℃左右，定容至1000ml，用酸度计或精密PH试纸测定培养基的PH一般要求5.8~6.0，过酸过碱则用1NNaoH和1NHCL调整。二、分装：用一个接有胶管的分装器趁热装培养基，1000ml培养基分装70支试管，即每支试

7、管15ml11左右（一般占试管、三角瓶容量1/4~1/3左右）注：培养基勿碰试管壁。三、包装：分装好的试管用棉塞塞上，包上包装纸，每5~7支试管捆成一扎，标明培养基代号即可进行灭菌。用具清理和洗涤：各种母液按原位置摆整齐，用过的量筒，移液管、烧杯、铝锅等用水洗涤干净，然后按次序放回原处。附：几种常用药剂的配制（一）用95%尝试酒精配比不同浓度的酒精的配制。学习配制70%和75%酒精。（二）消毒剂1.20%次氯酸钠溶液　　称取20g次氯酸钠用少许水溶解，100ml水定容。2.0.1%升汞（HgCl2）溶液　　称取0.1gHgCl2少许水溶解