组织培养实验(植物部分)

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1、实用文档组织细胞培养技术实验实验一植物组织培养的培养基的配制、灭菌与仪器操作培训实验二植物的离体培养实验三植物离体培养中的形态观察和愈伤组织继代培养大全实用文档实验一植物组织培养的培养基的配制、灭菌与仪器操作培训【目的要求】学习并掌握植物组织常用培养基的组成、配制与灭菌方法。培养基能够提供植物生长、繁殖所必须的各类营养物质，以及生长因子，是开展植物组织培养研究的基础和前提。植物的种类不同，研究的目的不同，所需要的培养基的种类也各不相同。【实验用品】1.实验用具：电子天平、烧杯、量筒、三角瓶或培养瓶、移液管、药匙、玻棒、pH试纸、吸耳

2、球、牛皮纸、皮筋等。2.药品：蔗糖、琼脂、0.1mol/LNaOH、0.1mol/LHCL、各种培养基母液、激素母液【内容与方法】1.分组配制培养基激素用分析天平称取生长素或细胞分裂素50-100mg。生长素用少量95%的酒精或0.1mol/L的NaOH溶解，细胞分裂素用0.1mol/LHCL加热溶解。加蒸馏水定容至100ml配制成0.5-1mg/L的溶液。∨激素﹦∨配制×培养基中所要求的激素浓度÷激素母液浓度2.湿热灭菌培养基称取规定数量的琼脂，加水到培养基最终容积的3/4，水浴或电炉使之加热溶解。根据配方要求，把按顺序量取的各种

3、母液以及称取的蔗糖，都加入煮好的琼脂中，然后加水定容。用0.1mol/L的NaOH或者HCl调pH。分装培养基，包好或盖好，标明编号。121℃(103kPa)灭菌15-20min。3.作好植物组织培养的各项准备工作制备无菌水：121℃(103kPa)灭菌40min；配制0.1%HgCl2溶液（放置棕色瓶中）；准备接种用培养皿、金属器械等用具。注意：大全实用文档1.实验前1天，无菌培养室每天都要用0.2%的新洁尔灭拖洗地面—次，超净工作台台面每次实验前要用75％酒精擦洗。然后紫外线消毒。2.实验中所用的各种容器一定要洗净、烘干。3.用

4、电子天平称量药品时，一定要用称量纸，对于有腐蚀性的药品，应将其放置在小烧杯中称量。4.各种母液应保存在2-4℃的冰箱中，以免变质、长霉。5.使用高压灭菌锅时，一定要正确操作，并提前检查其中的水是否合适。6.HgCl2属于一种腐蚀性极强的剧毒物品，配制时要注意安全。大全实用文档实验二植物的离体培养（两次课程）【目的要求】1：尝试进行植物的组织培养2：了解植物组织培养的基本原理【实验用品】   材料：胡萝卜、菊花花蕾，灭菌培养基，体积分数为70%的酒精，体积分数为20%的次氯酸钠溶液，无菌水。   用具：锥形瓶或大试管，烧杯，酒精灯，恒

5、温箱，接种箱，滤纸，消毒用酒精棉球，培养皿，解剖刀，镊子、打孔器。【内容与方法】1.外植体消毒：在接种箱上将胡萝卜段用酒精消毒并用无菌水清洗，再用次氯酸钠处理，立即用无菌水消毒。用无菌滤纸吸去外植体表面的水分，用无菌解剖刀锲成横切片，再选取有生命力旺盛的部位，切成小块。2.接种：将组织块接种到培养基上，用锡箔纸封盖瓶口，并用橡皮筋扎紧。3.培养：将接种后的组织块，放在23～26℃恒温避光条件下培养，一周后，检查培养材料的污染情况；14天后，观察愈伤组织的生长状况。大全实用文档实验三植物离体培养中的形态观察和愈伤组织继代培养【目的要求

6、】诱导愈伤组织是细胞培养的基础，愈伤组织经过不断继代培养才能变得疏松，易于分散，有利于建立良好的悬浮系。【实验用品】   材料：外植体组织。   用具：锥形瓶或大试管，烧杯，酒精灯，恒温箱，接种箱，滤纸，消毒用酒精棉球，培养皿，解剖刀，镊子、打孔器。【内容与方法】1.设计不同激素比例的继代培养基。2.选择待培养物伤口周围长出的淡黄色、疏松、生长良好的愈伤组织转移至新培养基中继代。3.培养：将接种后的组织块，放在23～26℃恒温避光条件下培养，一周后，观察愈伤组织的生长状况。以下部分内容供你们参考。大全实用文档植物组织与细胞培养技术实

7、验一、植物组织细胞培养及其操作的基本知识认识植物组织与细胞培养是把植物的器官、组织或单个细胞，应用无菌操作技术，使其在人工条件下能够继续生长，甚至发育成为完整植株的过程。植物的器官、组织或细胞在一定的培养条件下，原来已经分化不再生长的细胞又重新分裂，形成没有组织结构的细胞团，即愈伤组织，这一过程称为“脱分化作用”。然后，在一定的条件下，愈伤组织又能重新分化，形成输导组织以及根和芽等组织和器官，这一过程称为“再分化作用”。植物细胞的脱分化和再分化，充分体现了植物细胞的全能性。一、植物组织与细胞培养实验室植物组织与细胞培养室一般分为无菌

8、区、培养区和准备区三部分。无菌区应相对隔离，有空气净化装置，要求达到100000级。而保证接种无菌的超净台，要求清洁级别达到100级。培养区要求密闭，保湿保温。准备区的要求相对低些，以供工作人员更衣，并起到缓冲的作用。（一）无菌操作设