植物细胞组织培养技术实验指导书

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1、T植物细胞组织培养技术实验指导书中国计量学院生命科学学院二零零六年七月《植物细胞组织培养》实验指导10目录实验一、植物组织培养培养基母液的配制实验二、植物组织培养的培养基配制实验三、康乃馨的离体快繁实验四、胡萝卜愈伤组织的建立实验五、组织培养物的继代培养10实验一组织培养基母液的配制一、仪器及药品冰箱、天平（0.0001g）容量瓶:1000ml,500ml、250ml、100ml、25ml广口储液瓶：500ml、250ml、50ml、25ml烧杯：1000ml、500ml、250ml、100ml、50ml数十根玻璃搅棒、大药勺、小药

2、勺或挖耳勺标签纸、胶水、50%酒精、95%酒精、1mol/L盐酸、1mol/LNaOH几种常用的培养基所需的大量元素、微量元素、有机物、激素、铁盐等药品蒸馏水二、方法和步骤：按照培养基配方,把大量元素、微量元素、铁盐、有机物、植物激素分类,每一类中各种药品分别称量,如N6培养基各种母液的配制步骤如下：大量元素母液：包括用量较大的几种化合物〈见N6培养基配方〉，按表中排列顺序,将每种药品的用量扩大10倍，分别称取，分别溶解，然后按照顺序混合在一起。如钙盐等易发生沉淀的药品不能混合，应单位定容，最后加上蒸馏水，定容至1升或500毫升。在

3、定容时注意用蒸馏水洗净烧杯和玻璃搅棒以减少误差。定容后的溶液为大量元素母液，配制培养基时，每配1L培养基需吸取该母液l00ml或50ml。微量元素母液：因用量少，为了称量精确和方便,常配成100倍或1000倍的母液，即每种药品扩大l00倍或者l000倍。逐个溶解，混合在一起成为微量元素母液，每配1LN6培养基需吸取该母液10ml或者1ml。铁盐：在N6培养基中需要单独配制，它是由硫酸亚铁（FeSO4•7H2O）2.78g和乙二氨四乙酸二钠（Na2-EDTA）3.73g，分别溶解，混合后，用酒精灯加热半小时以上，冷却后定容至1L。冰箱

4、过夜贮藏无结晶析出，否则重新配制。每配l升N6培养基需加该铁盐母液5ml。10有机物质：主要指氨基酸，维生素类物质。它们大都是扩大1000倍，分别称量，分别定容和储存，配制培养基时按需要的量加入。植物激素：常用的有生长素类如：2,4-D、萘乙酸（NAA）、吲哚乙酸（IAA）、吲哚丁酸（IBA）；细胞分裂素类：激动素（KT）、6-苄基氨基嘌呤（6-BA）、玉米素（ZT）。配制时需要单个称量，根据需要可分别用酸、碱或酒精等不同的溶剂溶解后,再用蒸馏水配制成所需的浓度，一般为每ml含0.1-2mg，配制培养基时按所需要的量分别加入，本实验

5、中的2,4-D和6-BA均配成1mg/ml的母液。在配制吲哚乙酸（IAA）母液时，先用几滴95%酒精溶解完全后，加蒸馏水定容，否则会发生沉淀。而配制6-BA母液时，要用少量的1mol/LNaOH溶解；而配制2,4-D时，可先用少量的95%酒精溶解。　　表1　　N6　朱至清(1975)培养基配方药品名配方量(mg/L)母液倍数称取量(g/L)(NH4)2SO4大量元素46310×4.63KNO3283028.3CaCl2·2H2O1661.66MgSO4·7H2O1851.85KH2PO44004.0Na2-EDTA铁盐37.3100

6、×3.73FeSO4·7H2O27.82.78MnSO4·4H2O微量元素4.01000×4.0ZnSO4·7H2O3.83.8H3BO31.61.6KI0.80.8盐酸硫胺素(VB1)有机物质11000×1.0烟酸0.50.5盐酸吡哆醇(VB6)0.50.510甘氨酸2.02.0各种母液配制好后，要贴好标签，注明母液的名称，配制1L培养基需要的吸取量、母液配制的日期，然后放入冰箱中储存。一般无机物质的母液在冰箱中可保存半年以上，有机物质的母液保存时间在半年以内，但若发现有沉淀或霉变,应立即需重新配制。三、注意事项1.如药品所带结晶

7、水不同，应进行换算。2.因常用的MS培养基中硝酸铵(NH4NO3)属于公安部门严格限制管理的药品，所以本实验采用N6培养基替代MS培养基。10实验二培养基的配制一、仪器设备及试剂电炉天平（0.0001g）高压灭菌锅量筒：l0ml、20ml、100ml、500ml烧杯：1000ml、500ml、250ml移液管：1ml、2ml、5ml吸管若干、记号笔三角瓶或试管、试管架锡铂纸、玻璃棒配制好的各种母液，如大量元素母液、微量元素母液、铁盐、有机物、生长调节剂等，个别生长调节剂要随配随用。蒸馏水、pH试纸蔗糖、琼脂等1mol/LNaOH溶液

8、、1mol/LHCl溶液。二、方法和步骤1量取所配培养基总体积的2/3体积的蒸馏水，如要配l升培养基,先量取约700ml体积的水。2根据培养基配方，用量筒量取所需要的各种元素的母液。物质加入体积或重量大量元素母液(10×)100ml微