植物组织培养实验指导.doc

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1、《植物组织培养实验指导》《植物组织培养实验指导》的相关说明一、本指导用于《植物组织培养概论》课程的实验教学。一•、各专业班级根据实际情况做相应调整，调整情况详见各专业班级的授课计划。其中15个课时的内容调整如下:实验一、二、五3学时实验六3学时实验七3学时实验九、实验十二3学时实验一实验室基本设备及其用途的识别一、FI的认识植物组织培养实验室的基本结构，必须的基本设备及其用途与作用方法。二、实验室的基本结构（-）化学实验室（工作室）培养基药品称量、配制、分装、灭菌；材料预处理；培养材料的观察分析；制蒸憾水。设备、药柜、工作台、蒸锚水器、天平、冰箱，手提

2、高压消毒锅、显微镜、解剖镜、各种玻璃仪器、金属仪器等。安装水、电、排气等装置。（-）接种室%1无菌操作室%1接种箱%1超净工作台（三）培养室（四）洗涤、消毒室；卧式高压消毒锅。（五）温室（培养大棚）。实验二常用仪器、必要器皿、几种主要设备的使用方法、常用几种药剂的配制一、H的认识植物组织培养必需的仪器、器nil,几种主要设备的使用方法、常用几种药剂的配制。二、常用仪器1.蒸镭水器（学习操作）2.手提式高床消毒锅、卧式高床消毒锅（学习使用、操作）3・天平（1）药物天平（工业天平）、粗天平、（精密度1/10）（2）扭力天平（精密度1/100）（3）分析天平

3、（精密度1/10000）4.超净工作台（学习、使用、操作）5.电热干燥箱（烘箱）6•恒温光照培养箱（学习、操作）7.电冰箱&显微镜和解剖镜%1手提式解剖镜（学习、使用、操作）%1立体解剖镜%1普通显微镜9.旋转培养机10.离心机（学习、使用、操作）11.酸度测定仪：（1）精密PH4-7试纸；（2）笔型袖珍酸度计。三、必要的器皿（-）玻璃器皿1.培养器皿%1试管%1三角烧瓶（锥形瓶）%1圆形高形培养瓶（罐头瓶）%1培养皿%1扁身培养瓶%1L型和T型管%1凹而载玻片1.盛装器皿%1试剂瓶%1烧杯2.计量器皿%1量筒%1容量瓶%1吸管3.其它器皿滴瓶、称量瓶

4、、漏斗、玻璃管、注射器等实验室常用器皿。（二）金展器械1.银子类%120-25cm长型锻子（接种或转移愈伤组织）%1尖端弯曲“枪型”银子（锡取较小的植物组织）%1尖头钟表蹑子和鸭嘴锡子（剥离表皮用）%1尖端为小铲状银子（挖取带琼脂培养基的培养物）2.解剖刀和刀类%1眼科用刀种牛痘疫苗的菱形刀（切割柔软组织屮小细胞团）%1解剖刀（手术刀）%1双面刀片焊接在玻棒上（切取茎尖用）%1锋利小刀、大刀和小铁锹1.剪刀类①解剖剪②眉剪③眼科剪④18-25cm弯头剪%1修枝剪2.接种针四、几种常用药剂的配制（一）用95%尝试酒精配比不同浓度的酒精的配制。学习配制70

5、%和75%酒精。（二）消毒剂1.20%次氯酸钠溶液称取20g次氯酸钠用少许水溶解,100ml水定容。2.0.1%升汞（HgCl2）溶液称取0.1gHgCl2少许水溶解，100ml水定容。（三）洗涤剂1.2HC1酒精95%酒精100ml加入2mlHCl2.硫酸一重珞酸钾洗液称取10g重珞酸钾加入蒸倔水90ml,加热溶解冷却后，逐渐加入浓硫酸175ml,放入棕色玻璃瓶备用，（注意：切记不可将盛过洒精，甲醛等原剂的药品玻璃器皿直接泡入洗液在，因为重銘酸钾是一种强的氧化剂，一旦被还原氧化，洗液变绿，失去洗涤作用）。这些器皿必须用鬥来水冲洗干净并晾干再浸入洗液。

6、（四）1摩尔浓度（mg/L）NaOH和1摩尔浓度（mg/L）HC1配制。摩尔浓度是指用1升（1000ml）溶液屮所含溶质的分子量数来表示的溶液的浓度。用M表示。1.NaOH摩尔浓度（M）NaOH摩尔质量二分子克数=40glMNaOH是指1000ml溶液屮含有40克摩尔质量的NaOH,现要配制100ml40X0.1=4g称取NaOH4g,用少量溶解，定容100ml.1.HC1的摩尔浓度具体配制酸的mol浓度吋，应考虑原浓酸的比重mol浓度。要求配制的mol浓度X需配制的体积X原酸分子量V=原酸的百分浓度X原酸的比重X1000配制1.0MHC1100ml,

7、量取38%,比重为1.19的HC18.06ml加蒸倔水，定容至lOOmlo实验三洗涤一一灭菌植物组织培养能否成功重要的一环是在无菌条件下进行操作与培养，导致污染的来源主要有：（1）器皿和用具；（2）培养基；⑶培养材料；（4）工作人员本身；（5）操作时的空气。防止污染的有效方法是将所有与培养有关的器1111,用具、培养基、接种室、培养室等进行灭菌和无菌操作。一、洗涤（一）玻璃器皿的洗涤1.新购置的玻璃器皿的洗涤（学习、操作）因有游离碱性物质，使用前先用1%稀盐酸浸泡一•夜，然后用肥皂水洗净，清水冲洗，最后用蒸锚水冲洗一次，干后备用。2.已用过玻璃器皿先将

8、残渣除去；用清水洗净，再用热肥皂水或洗衣粉洗净，清水冲洗干净，最后用蒸锚水冲洗一次，干后备用。