实验 芦丁的鉴定.ppt

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1、实验芦丁的鉴定实验目的实验内容思考题实验目的掌握黄酮类成分的主要性质及黄酮苷、苷元和糖部分的鉴定方法实验内容一、化学检识取芦丁3~4mg，用无水乙醇5~6ml溶解，分成3份做以下试验。（1）取上述溶液1~2ml，加2滴浓盐酸，摇匀，再酌加少许镁粉，注意观察颜色变化情况（2）取上述溶液1~2ml，加2%ZrOCl2的甲醇溶液，注意观察颜色变化情况，再继续向试管中加入2%柠檬的甲醇溶液，并详细记录颜色变化情况（3）α-茶酚反应（MolishsReacfion）取上述溶液1~2ml，然后加10%α-茶酚乙醇溶液，摇匀，沿管壁滴加浓硫酸，注意观察两液面产生的颜色变化二．纸色谱及薄

2、层色谱鉴别1.纸色谱：新化一号层析滤纸样品:自制芦丁、槲皮素对照品:芦丁、槲皮素展开剂:(1)正丁醇-醋酸-水（4:1:5上层或4:1:1）(2)25%醋酸水溶液(3)85%醋酸水溶液显色:(1)可见光下观察，再在紫外光下观察(2)经氨气后再观察(3)喷三氧化铝试剂后再观察2.芦丁和槲皮素的聚酰胺薄层色谱鉴定：新化一号层析滤纸样品:自制芦丁、槲皮素对照品:芦丁、槲皮素展开剂:乙醇-水（7:3）显色:（1）可见光下观察，再在紫外光下观察（2）经氨气后再观察（3）喷三氧化铝试剂后再观察3.糖的检出一纸色谱析法：取上述滤除槲皮素时保留的水解滤液20ml加Ba(OH)2的细粉（约

3、2.6克）中和至PH7。滤除生成的BaSO4沉淀（可用滑石粉助滤）。滤液浓缩至约1ml。供纸层析点样用。展开剂正丁醇-醋酸-水（4:1:5上层或4:1:1）对照品葡萄糖、水解液鼠李糖水溶液显色剂苯胺邻苯二甲酸盐试剂喷后，105℃烘十分钟。显棕色或红色斑点。三、槲皮素五甲醚的制备取槲皮素结晶4000mg，置于150ml的三颈瓶中，加50ml无水丙酮，装上电动搅拌器，冷凝管及温度计，加热回流搅拌，每间隔一适当时间加入无水碳酸钾0.2克和硫酸二甲酯0.2ml，大约在1.5小时左右加完4克无水碳酸二甲酯，继续加热回流搅拌直至溶液黄色完全消退为止，约需4~5小时，停止加热，取下烧瓶

4、，反应液经过滤，沉淀用热丙酮洗涤数次，合并洗、滤液、蒸馏回收部分丙酮，留存10~15ml，放置，渐渐析出无色结晶，母液浓缩，复得一批结晶，如母液浓缩后呈糖浆状不能析出结晶，应加5%NaOH数滴，振摇使硫酸二甲酯水解，此时又可析出一小部份结晶，合并，以乙醇重结晶,得皮槲素五甲醚(mp152~153℃)四、槲皮素的降解取槲皮素50mg，置于圆底烧瓶中，加水5ml，乙醇6ml，KOH2g，置水浴上加热回流10小时，蒸去乙醇，加水50ml溶解，用浓盐酸酸化至pH2~3，用乙醚萃取三次，合并乙醚液，回收乙醚，供薄层层析点伴用。五、槲皮素降解产物的薄层色谱硅胶-CMC-Na薄层对照品

5、：原儿茶酸（Protocatechuicacid）间苯三酚（Phloroglucinol）。展开剂：氯仿-丙酮-醋酸（8:2:0.5）显色剂：三氧化铁试剂六、紫外吸收光谱测定槲皮素（一）原理利用紫外吸收光谱，测定黄酮化合物在加入各种电解质或络合剂后吸收峰的位移，根据位移的情况，以判断该化合物羟基的位置（二）试剂无水甲醇甲醇钠溶液氢氧化钠溶液三氯化铝溶液醋酸钠硼酸饱和液（三）测定方法1．黄酮羟基位置的测定：精密称取黄酮样品（槲皮素）约1.2mg，用无水甲醇溶解，再稀释至100ml（1）黄酮光谱：取样品溶液约3ml，在200~500nm波段内进行扫描。（2）氢氧化钠光谱：取样

6、品溶液约3ml，加入氢氧化钠溶液2~3滴立即测定。放置5分钟后，再测定。（3）甲醇钠光谱：取样品溶液约3ml，加入甲醇钠溶液5~7滴后，立即进行测定，放置5分钟后，测定。（4）三氯化铝光谱：在盛有约3ml样品溶液的石英杯中，加入三氯化铝溶液6滴，放置一分钟后进行测定，测定后，加入3滴盐酸溶液（浓盐酸：水=1:1），测定。（5）醋酸钠光谱：取样品溶液约3ml，加入过量的无水醋酸钠固体，摇匀：杯底剩有约2mm的醋酸钠后，三分钟内进行测定（四）测定结果槲皮素加位移试剂结果表（λnm）克分子吸收系数的测定：根据已测定的黄酮光谱，测量吸收峰的波长和吸收峰前后20nm的波长范围。然后

7、取样品溶液约3ml，置于1cm长的石英杯中，测UV，仔细测量在上述波长范围内各波长的吸收值，反复测定三次。加入试剂编号II峰I峰位移值羟基位置无水甲醇1256371NaOH2430I峰△594’-OHNaOH5’2’分解分解3，4’-OHMeONa3416I峰△453-OHMeONa53’分解分解3，4’-OHAlCI34270450I峰△793，5及3’,4’-OHAICI3/HCI4’265425I峰△543’，4’-OHNaOAC5277387II峰△217-OHNaOAC/H3BO33259385I峰△143’，4-O