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1、综合实验槐花米中芦丁的提取与鉴定(%1)实验目的(1)通过芦丁的提取与精制，掌握碱溶酸沉法提取黄酮类化合物的原理和操作。(2)掌握黄酮类化合物的主要性质及黄酮昔的检识方法。(3)掌握快速柱层析法的操作。(4)掌握由芦丁水解制取榊皮素的方法。(%1)实验原理芦丁((mtin)亦称芸香甘(rutinoside),为黄酮甘，广泛存在于植物中，其中以槐花米(为槐树Sophorajapnica,的花蕾)和乔麦叶中含量较高。芦丁的主要药理作用有抗炎作用、维P样作用及抗病毒作用,具有维持血管抵抗力，释低其通透性，减少脆性的作用
2、；对脂肪肝有去脂的作用，与谷胱甘肽合去脂作用更明显；对于放射性伤害所引起的出血症也有一定治疗作用；临床上只要作防治高血压的辅助药物，毛细血管性止血药。芦丁水解后可生成榊皮素，榊皮素有一定的平喘作用；此外还有降低血压，增强毛细血管抵抗力，减少毛细血管脆性,降血脂，扩张张冠动脉，增加冠状动脉血流量的作用。槐花米中含芦丁8%〜28%,槐花米甲素sophorinA14%,槐花乙素sophorinB1.25%,槐花米丙素sophorinC0.35%,也含榊皮素quercetin>白桦脂醇betulin,槐二醇sophora
3、diol等。本实验以常用中药槐花米为原料，对其主要成分芦丁进行提取分综合实验槐花米中芦丁的提取与鉴定(%1)实验目的(1)通过芦丁的提取与精制，掌握碱溶酸沉法提取黄酮类化合物的原理和操作。(2)掌握黄酮类化合物的主要性质及黄酮昔的检识方法。(3)掌握快速柱层析法的操作。(4)掌握由芦丁水解制取榊皮素的方法。(%1)实验原理芦丁((mtin)亦称芸香甘(rutinoside),为黄酮甘，广泛存在于植物中，其中以槐花米(为槐树Sophorajapnica,的花蕾)和乔麦叶中含量较高。芦丁的主要药理作用有抗炎作用、维P
4、样作用及抗病毒作用,具有维持血管抵抗力，释低其通透性，减少脆性的作用；对脂肪肝有去脂的作用，与谷胱甘肽合去脂作用更明显；对于放射性伤害所引起的出血症也有一定治疗作用；临床上只要作防治高血压的辅助药物，毛细血管性止血药。芦丁水解后可生成榊皮素，榊皮素有一定的平喘作用；此外还有降低血压，增强毛细血管抵抗力，减少毛细血管脆性,降血脂，扩张张冠动脉，增加冠状动脉血流量的作用。槐花米中含芦丁8%〜28%,槐花米甲素sophorinA14%,槐花乙素sophorinB1.25%,槐花米丙素sophorinC0.35%,也含榊
5、皮素quercetin>白桦脂醇betulin,槐二醇sophoradiol等。本实验以常用中药槐花米为原料，对其主要成分芦丁进行提取分离及鉴定。根据芦丁分子中具有酚经基，显弱酸性，能与碱成盐而增大溶解度，以碱水为溶剂煮沸提取，其提液加酸后加酸酸化则芦丁游离析出（碱溶酸沉法），然后町通过其在冷水和热水中的溶解度差异的特性进行纯化，同时也可通过快速柱层析法对粗品进行纯化。OHIoOH芦丁:R二一葡萄糖一鼠李糖；t［皮素，R=HLU（三）实验步骤1•芦丁的提取于250mL烧杯中加人60mL石灰水溶液，0.25g硼砂，
6、置于石棉网上加热至微沸后，加入5g槐花米粗粉，保持微沸30min（不断搅拌）后，趁热用棉花过滤，滤液再趁热抽滤。滤渣再用40mL石灰水溶液同法操作两次。合并滤液，然后在60-70°C保温情况下，以15%盐酸液调节pH为3〜4。静置至少2h（可放置过夜或中午放置或下午处理），使沉淀完全，抽滤，沉淀用蒸憎水洗涤至中性，于燥，称量。2.快速柱层析法分离纯化芦丁称取0・15g芦丁粗产品，在通风橱中加少量甲醇热水浴溶解，拌人0.2g柱•层析硅胶H,热水浴挥发甲醇，然后于红外灯下烘于。称取3g柱层析用硅胶H,装填于层析柱中，
7、注意装填密实均匀,然后将所伴的样品均匀的铺在硅胶H上方，再加一层石英砂，快速柱即装填成功。配制2种洗脱液，然后加压洗脱⑴。洗脱液a为:乙酸乙醋一丙酮（2:l）30mL,b：乙酸乙酯-丙酮-乙酸（3:3:4）30mLo先用a洗脱，再用b洗脱，每次接收8〜10mL,收集洗脱组分并编号。将少量芦丁粗产品、芦丁标样、桝皮素标样用乙醇溶解，作点样用。将上述步骤所收集得到的各组分与其进行薄层板对照，用乙酸乙醋一丁酮一冰醋酸一水（5：3：1：1）混合溶剂为展开液展开，确定各组分的成分。注［1］加压过柱可变成减压过柱或常压过柱（
8、可将填柱的硅胶增加至8-10g）2.芦丁粗品的重结晶将剩余粗品按在热水屮1:200的溶解度加蒸馆水进行重结晶。将沉淀悬浮于蒸憎水中，加热煮沸15min,趁热过滤。滤液充分静置析出晶体，抽滤，60〜70°C干燥，称量。测定熔点和红外光谱，与标准品对照。3.芦丁水解制取榊皮素称取3g得到的芦丁纯品溶于95%乙醇屮（每lg芦丁需加约35mL乙醇），加入lmol/LH2S04溶液
