槐花米中芦丁的鉴定.ppt

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1、上次实验报告的修订45图1聚酰胺色谱柱层析后的收集液的聚酰胺薄膜层析分析图说明：图1中的1表示收集液1；2表示收集液2；3表示收集液3；4表示芦丁标准品；5表示槲皮素标准品。12345上次实验报告的修订结论：因为Rfa=Rfd，说明收集液1是芦丁。因为Rfb1=Rfd；Rfb2=Rfe，说明收集液2是芦丁和槲皮素的混合物。因为Rfc=Rfe；说明收集液3是槲皮素。所以，用聚酰胺柱层析的方法分离芦丁和槲皮素，用50%的乙醇，90%的乙醇梯度洗脱时，先从柱子流出的是芦丁，其次是槲皮素。实验五槐花米中芦丁的鉴定一、实验目的掌握硅胶薄层层析鉴

2、定鼠李糖和葡萄糖的方法。掌握芦丁和槲皮素的化学检识方法。二．实验原理1.根据鼠李糖和葡萄糖在硅胶板上的分配系数不同达到分离的目的。2.根据芦丁和槲皮素的理化性质来检识芦丁和槲皮素。三．实验操作（一）糖液的硅胶薄层层析1.硅胶板的活化；2.配制展开剂，正丁醇：醋酸：水＝4：1：53.将展开剂倒入层析缸中，展开缸中展开剂的高度4mm左右。4.画基线，基线距底边1.0～1.5cm；（一）糖液的硅胶薄层层析5.点样（点样顺序为：糖液、鼠李糖、葡萄糖），点样一般为圆点，点样直径一般不大于2mm，点样时必须注意勿伤薄层表面。6.将硅胶板放入展开缸

3、的展开剂中，浸入展开剂的深度为距圆点5mm为宜，一般展距为8cm，取出薄层板，晾干。（一）糖液的硅胶薄层层析7.喷苯胺－邻苯二甲酸试剂，在105℃下烘10min。8.实验结果见图1。（二）芦丁、槲皮素及糖的化学检识1.浓硫酸和浓盐酸反应取芦丁或槲皮素数毫克于比色瓷板上，分别加浓硫酸或浓盐酸1滴，注意呈色变化，研磨后溶解成橙色溶液，加较多量的水稀释后转为浅黄色，析出黄色沉淀。2.酸性试验：取小试管8支，每4支一组，第一组每管中加入芦丁1mg，第二组每管中加入槲皮素1mg，每组试管中分别加入稀氨水、5%碳酸氢钠、5%碳酸钠水溶液、1%氢氧

4、化钠水溶液各2ml，振摇后观察各管溶解情况。溶解的溶液应呈黄色。再加浓盐酸滴酸化，黄色褪去或变浅，并有沉淀析出或产生混浊。3.莫氏（molish）反应取试样1mg置小试管中，加乙醇1ml溶解，加α-萘酚1-2滴，摇匀，倾斜试管，沿管壁徐徐注入浓H2SO4约1ml，静置。观察两层溶液的界面变化，出现紫色环者为阳性，表示样品分子中含有糖的结构（糖和苷类均呈阳性反应）。比较芸香苷和槲皮素的不同。4.镁粉—盐酸试验：取芦丁1mg，加乙醇2ml在水浴上加热溶解，加入少许镁粉，滴加数滴浓HCl，溶液由黄色渐变红色者表示有黄酮类化合物。以同法试验槲

5、皮素。5.三氯化铝反应：取样品1mg溶于1ml乙醇中，加1%三氯化铁乙醇液2-3滴，黄酮类呈鲜黄色。6.醋酸镁反应取样品乙醇液与醋酸镁试剂作纸上反映，观察荧光。二氢黄酮，二氢黄酮醇类可显天蓝色荧光，若有5-OH，色泽更明显。而黄酮，黄酮醇和异黄酮类等显黄色—橙色—褐色荧光。7.三氯化铁反应取样品1mg溶于1ml乙醇中，加1%三氯化铁乙醇液1-2滴，注意呈色变化。一般对黄酮类3-羟基者呈褐色，5-羟基者呈绿色，3、5-二羟基者呈深蓝色。