栉江珧解剖卵的体外促熟研究.pdf

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1、第45卷第12期2015年12月中国海洋大学学报PERIODICALOFOCEANUNIVERSITYOFCHINA45(12)：038～042Dec．，2015研究简报栉江珧解剖卵的体外促熟研究。李浩浩，王昌勃，于瑞海，牟宗宝，李琪料(中国海洋大学海水养殖教育部重点实验室，山东青岛266003)摘要：本研究探讨了在不同浓度或不同处理时间下氨海水、5一羟色胺、多巴胺和维生素对栉江珧(A￡ri卵npectinata)解剖卵的促熟作用。通过体外浸泡的方法处理栉江珧卵母细胞使其成熟，并完成人工授精。研究表明：浓度0．008％～0．014％的氨海水处理40～60rain可显

2、著提高栉江珧解剖卵的生发泡破裂率和受精率(P

3、门(Mollusca)瓣鳃纲(Lamellibranchia)贻贝目(Mytiloi—da)江珧科(Pinnidae)江珧属(Atrina)E1

4、，俗称“海锹”、“大海红”，广泛分布于温、热带泥沙质近海海域，在中国渤、黄、东、南海均有分布。江珧柱肉质细嫩肥白，营养丰富，深受国内外市场的欢迎[2]。近年来，由于环境污染和过度捕捞，造成栉江珧野生资源总量急剧减少，产量难以满足市场消费需求[3]。为了提高产量，国内外学者开展了栉江珧的人工育苗和养殖技术等方面的研究[4。5]，发现栉江珧排卵较难，即使亲贝性腺饱满、成熟度高，自然排卵和人工催产仍很困难，这制约了栉江珧的人工育

5、苗及规模化生产。而解剖法是一种快速、方便的育苗方式[6]，但在栉江珧育苗中应用很少。贝类的繁殖中，精子活力和卵子的成熟度是决定受精作用和胚胎发育顺利的关键因素[7]。目前，在双壳贝类人工育苗中常会遇到如何获取成熟卵子的问题，而双壳贝类的卵子多是分批成熟的，解剖获得的卵子存在成熟度不够及发育不同步的现象，即使亲贝性腺成熟度高，解剖获取的卵子仍需要体外促熟，才能受精和正常发育[8]。目前，国内外学者开展了氨海水、5一羟色胺(5一HT)、多巴胺、维生素等药物在不同浓度、不同处理时间下对双壳贝类解剖卵的体外促熟研究[9。12

6、，为栉江珧体外促熟研究提供了借鉴。栉江珧属于减数

7、第一次分裂中期受精，解剖出的成熟卵大都处于减数第一次分裂前期，需要对卵子促熟，才能使其成熟[1引。本实验用不同浓度的氨海水、5一羟色胺、多巴胺和维生素在不同处理时间下对栉江珧解剖卵进行促熟，通过观察生发泡破裂(GerminalVes—icleBreakdown，GVBD)[14I、受精和畸形情况，分析得出栉江珧解剖卵适宜的促熟药品及其最适浓度、最适授精时间，建立栉江珧解剖卵的体外促熟技术，并进行育苗生产应用试验，规模化培育了育苗生产所需的幼虫，为建立相关类型贝类解剖卵的体外促熟技术和栉江珧人工育苗提供了基础资料。1材料与方法1．1精卵的获得实验用栉江珧亲贝为烟台海区

8、养殖的成熟2～4龄贝。亲贝经过暂养稳定后，挑选发育良好的亲贝，解剖获得精卵[15I。将卵液用100目筛绢滤去较大组织块后，再用400目筛绢去除组织液和微小杂质；精液用300目筛绢过滤，收集。检查精卵状态，选用活性好的精子和成熟度高的卵子用于实验。1．2卵母细胞的促熟1．2．1药物浓度实验室温下(23±1℃)用10mL离心管分别加入等量卵液，再加入等量不同浓度的处*基金项目：国家十二五科技支撑计划项目(2011BADl3801)；国家海洋公益性行业科研专项(201305005)；山东省优秀中青年科学家科研奖励基金项目(BS2012HZ020)资助收稿日期：2014一l

9、O一30；修订日期：201504—17作者简介：李浩浩(1991一)，男，硕士生，主要从事贝类遗传育种研究。Email：haohaolilll0@126．corn**通讯作者：E-mail：qili66@OUC．edu．crl12期李浩浩，等：栉江珧解剖卵的体外促熟研究理液，控制卵密度为500～1000个／mL，摇匀计时。氨海水处理浓度梯度设定为0．002％、0．008％、0．014％、0．020％和0．026％(以分析纯氨水25％～26％为100％)；5一羟色胺处理浓度梯度设定为1、2、3和4mmol／L；多巴胺处理浓度梯度设定为0．001、0．01、0．1和