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《贝类精子质量检测与评价方法的研究Ⅴ栉江珧精子线粒体活性的荧光检测.pdf》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、第31卷第6期广东海洋大学学报V01.31No.62011年12月JournalofGuangdongOceanUniversityDec.2011贝类精子质量检测与评价方法的研究V:栉江珧精子线粒体活性的荧光检测郑娇,王梅芳,余祥勇(广东海洋大学水产学院,广东湛江524025)摘要:采用罗丹明123(Rhl23)和碘化丙啶(PI)两种荧光染料对栉江珧(Atrinapectinata)精子线粒体活性进行检测,比较不同染液浓度和染色时间的检测效果,并用该方法检测和比较超低温冷冻保存对线粒体活性的影响
2、。结果显示:Rhl23和PI染色的最适染液浓度均为10Ixg/mL,染色时间控制在10min之内;染色后具有线粒体活性的精子发出绿色荧光,死精子发出红色荧光,质膜受损但线粒体还未受损的精子发出红绿色荧光,表明Rhl23和PI双荧光染色检测栉江珧精子线粒体活性是可行的;精液经冷冻后,线粒体活性为61.9%、质膜完整率56.8%,显著低于新鲜精液组(95.3%、93.5%),表明冷冻对精子结构会造成不同程度的损伤,Rhl23和PI双荧光染色法可用来检测栉江珧精子质量。关键词:栉江珧;精子;线粒体;罗丹
3、明123(Rhl23);碘化丙啶(PI);荧光染色中图分类号:Q959.215;Q954.43文献标志码:A文章编号:1673—9159(2011)06—0086—05StudyofQualityDetectionandEvaluationonSpermofMolluscV:DetectionofSpermMitoehondrialActivityofAtrinapectinatabyUsingFluorescentDyeZHENG-Jiao,WANGMei-fang,YUXiang—yong(F
4、isheriesCollege,GuangdongOceanUniversity,Zhanjiang524025,China)Abstract:Twofluorescentdyes,Rhodaminel23(Rhl23)andPropidiumiodide(PI),wereusedtodetectthemitochondrialactivityofthespermatozoaofAtrinapectinata,andthetestingeffectofdifferentstainingtimean
5、ddyeconcentrationwerealsocompared,andthemitochonddalactivityofspermaftercryopreservation(frozeninliquidnitrogenfor24h1wasdetected.Theresultshowedthatthemosteffe:ctivestainingappearedwhentheconcentrationofRhodaminel23andPropidiumiodidewerel0I,tg/mL,and
6、theoptimumreactiontimewas10min.Theactivityofmitochondfiaspermemittedgreenfluorescence,anddeadspermemittedredfluorescence.andspermwithdamagedplasmalemmaandundamagedmitochondriasentoutred—greenfluorescence.Therefore.Rhl23-PIdoublestainingwasfeasible.Fro
7、zensperm’Smitochondrialactivityandplasmamembraneintegrity’was61.8%,56.8%,respectively,andwaslowerthanfreshsperm(95.3%,93.5%).Theresultindicatedthatthefreezing··thawingprocessdamagedspermstructureandRh123-·PIdoublestainingcoulddetectthequalityofthesper
8、matozoaofAtrinapectinata.·、Keywords:Atrinapectinata;spermatozoa;mitochondria;Rhodaminel23;Propidiumiodide;fluorescentstaining收稿日期:2011-10—11基金项目:公益性行业(农业)科研专项(200903028);广东省科技计划项目(20108031300011)第一作者:郑娇(1986一),女,硕士研究生,海产经济动物发育生物学。通讯作者:余祥勇(1966
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