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1、高速逆流色谱技术在植物特殊化学成分研究方面的应用2010-2011学年第一学期仪器分析班级：植物科学与技术08-2班学号：0807103043姓名：郭凯高速逆流色谱技术在植物特殊化学成分研究方面的应用摘要：植物特殊化学成分因其特有的化学结构复杂性和生物活性多样性，一直是国内外关注及研究的热点，本文逋过高速逆流色谱的原理、高速逆流色谱的特点、及高速逆流色谱的应用过程等方面简单介绍了高速逆流色谱技术在植物特殊化学成分研究方面的应用。关键词：特殊化学成分；高速逆流色谱；应用正文:植物特殊化学成分广泛地应用于创新药物、植物提取、保健品、食品、化妆品等行业屮，而

2、以上工作迫切需要各种天然产物标准样品。为了改善我国天然产物标准样品数量不足的现状，H前，许多科研单位及研究人员正积极开展对标准样品的研制工作。在天然产物分离纯化过程屮，一些常用的分离提取方法，如：索氏提取法、水蒸气蒸馆、液液萃取等只能在天然产物有效成分的粗提过程屮使用。如何将粗提物迸•一步纯化，从而达到天然产物标准样品研制的要求，受到研究人员的关注。在柱层析、膜分离技术、超临界萃取等多种分离纯化手段屮，选择可以满足一定制备规模及其纯化要求的理想方法，是冃前研究关注的重点。H前，在天然产物标准样品研制的过程小，以植物体内二次代谢产物的提取分离为研究的重点

3、，其小色扌G有机酸、内酯、多酚、生物碱、砧类、黄酮类、香豆素、木质索、醍类、番体及其昔类等。但是，以上化合物的分离纯化是一个复杂的过程，而且H前所使用的分离纯化技术远远不能令人满意。传统的分离方法对含量低、结构和性质相似以及不能结晶的组分的分离纯化常常受到限制，还存在着固态载体的吸附损耗、样品可能变性、回收率低等问题。一、高速逆流色谱的原理高速逆流色谱(high-speedChemicalstructureofesculetincounter-currentchromatography,HSCCC)是一种基于运转螺旋管内两相溶剂的单向性流体动力学现象而

4、获得高效率分离的色谱系统，是一种连续的无需任何固体支持物的高效、快速的液■液分配色谱分离技术。它不使用固相载体作固定相，克服了固札I载体带來的样品不可逆吸附、污染、失活和变性等缺点，并且分离量大，样品无损失，回收率高，节约溶剂，而且分离物能达到相当高的纯度。因此，HSCCC已广泛用于分离天然产物屮的有效成分和屮国传统屮纱的研究，如苯内素类物质、香豆索类物质、蔡醍索类物质、黄酮类物质。高速逆流色谱法是由Ito于20世纪80年代研发的一种新型液液分配技术。该技术无需固体载体，消除了样甜的不可逆吸附，且具有分离度高、重现性好、分离量大等优势，广泛应用于天然植

5、物的分离。流体动力学小有一•种特殊的动力学平衡现象，即单向流体动力学平衡现象，在这样的动力平衡体系屮，两种互不混溶的溶剂相在转动螺旋管屮单向地分布。HSCCC就是利用这种现象，让色谱仪屮的螺旋管做行星运动，由于重力及螺旋管力的作用，固定札I移向螺旋管的入端，使得固定相得以保留，同吋两相溶剂在螺旋管屮得以混合。由于各溶质在两种互不相溶的溶剂系统屮分配系数不同，从而得以分离。二、高速逆流色谱的特点HSCCC作为一种常用的分离纯化技术，具有以下优点：（1）无不可逆吸附。聚四氟乙烯管小的固定相不需要载体，可以消除固■液色谱屮因使用载体而带的吸附现象，避免样品在

6、分离过程可能存在的变性，适用于分离极性物质和生物活性物质。（2）冋收率高。由于液体作为流动相和固定相，滞留在柱屮的样品可以通过多种洗脱方式予以完全回收，能够同时完成分离纯化与制备，适于制备性分离。（3）操作简单快捷。因其固定相为液体，体系更换与平衡较常规方法方便、快捷。（4）进样量大。与HPLC相比，HSCCC进样量最多可达到克级水平，是HPLC的数百倍。（5）分离效率高。与常压、低圧色谱相比，HSCCC的分离能力强，有些样品经一次分离即得到1个甚至多个化合物，并且分离吋间短，纯度高。三、高速逆流色谱的影响因素由于高速逆流色谱是无需任何固态载体支撑的液

7、・液色谱，其屮作为固定相的液体在色谱柱屮的保留程度对于高速逆流色谱的分离过程是十分重要的。首先，所选择的溶剂体系对固定相保留率有很大的影响，如两相密度差、粘度、界而张力等。通过研究表明，两相的密度差对固定相保留率的影响最大，固定相保留率和密度差基本呈线性关系。其次，还存在一些人为可以操控的条件会对固定相保留率产生影响，如高速逆流色谱的转速、流速、以及柱温等。其屮,螺旋管柱的转速以及它产生的离心力场对两相的混合程度具有决定性的影响。因此，对于界而张力较高的溶剂系统，应使用较高的转速，以使两相Z间能够剧烈的混合，从血促进分配和减少质点传递的阻力。对于界面张

8、力较低的溶剂系统，应使用较低的转速，以避免过分混合引起的乳化作用，以及固定相流失的问题。在流动