D-氨基酸氧化酶的分离纯化及固定化研究.pdf

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1、化工设计通讯医药化工第43卷第6期ChemicalEngineeringDesignCommunicationsPharmaceuticalandChemical2017年6月D-氨基酸氧化酶的分离纯化及固定化研究12张军耀，夏敬云（1.新昌县大众化工有限公司，浙江绍兴312500；2.浙江来益生物技术有限公司，浙江嵊州312400）摘　要：在工业生产的原料当中，D-氨基酸氧化酶属于一种具有重要的工业价值的原料，可以良好构建出大肠杆菌中经过乳糖诱导发酵的表达式，从而对其中的菌体进行提取粗酶液，在进行固化提纯的过程当中，需要保证其中的活性物质的活性没有

2、明显的损失，提升其底物部分的转化率，因此就需要对氨基酸氧化酶的分离提纯技术进行研究。首先对D-氨基酸氧化酶进行了概述，其次对其提纯固化的方式进行了研究。关键词：D-氨基酸氧化酶；分离纯化；固定化中图分类号：Q814文献标志码：B文章编号：1003–6490（2017）06–0175–02StudyonIsolation，PurificationandImmobilizationofD-AminoAcidOxidaseZhangJun-yao，XiaJing-yunAbstract：Intherawmaterialsofindustrialproduc

3、tion，D-aminoacidoxidasebelongstoakindofrawmaterialwhichhasimportantindustrialvalue.Itcanconstructtheexpressionoflactose-inducedfermentationinEscherichiacoli，soastoextractthebacteriaIntheprocessofcuringandpurification，itisnecessarytoensurethatthereisnosignificantlossoftheactivit

4、yoftheactivesubstance，andtheconversionrateofthesubstrateisimproved.Therefore，itisnecessarytostudytheseparationandpurificationtechnologyofaminoacidoxidaseTheInthispaper，theD-aminoacidoxidasewasfirstreviewed，andthepracticalapplicationofthemethodwasstudied.Keywords：D-aminoacidoxid

5、ase；isolationandpurification；immobilization随着现代工业的不断发展，很多新型的原料被应用在了菌体当中得到充分的破碎。在进行实验的时候，需要将氨基工业生产当中，在提高了工业生产效率的同时，也对于原料酸氧化酶无细胞提取液按照规定的比例加入到载体当中，在资源的利用程度进行了不断的提高。在这个过程当中，氨基保证和载体进行充分融合之后，就可以充分地对其实验洗白，酸氧化酶便是一种相当重要的原材料，可以利用其催化反应最终得到纯酶液，来进行固定化的研究。进行形成相对应的酮酸和氧，并且将氧化氢等物质进行释放。最后在对DAAO进

6、行固定化的实验当中，可以利用纯酶在对物质进行提纯的过程当中需要进行不断的深入研究，从液进行实验检测，用环氧活化的聚丙烯酸载体来进行固定化，而保证其提纯过程当中纯净程度，从而为工业生产提供更高并且按照载体和纯酶的科学的比例下利用磷酸来进行缓冲液纯净度的原材料。的洗涤，在4℃的温度下得到保存备用之后，就可以取得固定1D-氨基酸氧化酶概述化的酶，之后就可以对其中的蛋白吸附率以及活力回收率进D-氨基酸氧化酶，属于一种以黄素腺嗓吟二核昔酸为辅行计算，最终对其固定效果进行考察。基的典型黄素蛋白酶类，在实际的生产应用当中可以对其进2.2实验结果与结论行催化，其中产

7、生的氧化脱氧反应可以生成相对应的酮酸和经过上述的实验方式，可以得出超声破壁的最适当的时氧，在其中会受到分子氧气的还原影响，进行氧化氢的释放。间，在经过不同时间的超声破壁的实验下，可以发现其超声在这个过程当中，由于酶对于其催化反应当中底物的高度在在16min的工作时间之内，其中酶的活力是处于最高的状态当。选择方面是具有相当大的光谱性的，因此可以利用此种特点如果时间过长的话，酶的活力反而会下降，在这个过程当中来对其进行定量分析，在分析当中，需要充分的实现两步酶超声的时间在过长的情况下，会在很大程度上引起酶液的温法进行生产。在D-氨基酸氧化酶的实际应用当中

8、，在工业生度的升高，而对酶的活力造成不利的影响，最终影响其蛋白产当中可以作为主要的工业用酶进行实际的应用，并