绿豆芽中SOD的分离纯化、固定化及性质研究-论文.pdf

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1、食品研究与开发2014年3月分离提取FoodResearchAndDevelopment第35卷第5期27==--DOI：10．3969／j．issn．1005-6521．2014．05．008绿豆芽中SOD的分离纯化、固定化及性质研究梁丽琴，程琳，李继变，段江燕(山西师范大学生命科学学院，山西临汾041004)摘要：为降低SOD生产成本，提高其稳定性及其重复利用率，选用绿豆芽为材料，对SOD进行分离纯化，固定化及性质研究。结果表明，用0．05mol／LpH7．8磷酸缓冲液(含0．1mol／LMEDT

2、A)提取SOD，40％饱和度的硫酸铵去除杂蛋白、80％饱和度的硫酸铵沉淀SOD，DEAE一纤维素一柱层析纯化，SOD的纯度可达4．662x10kat／mg蛋白，总酶活回收率达43．7％，纯化倍数达26．4；包埋剂聚丙烯酰胺凝胶的浓度为22．5％时，固定化酶的结合效率为87．O％，固定化酶的活力回收率为80．9％；H20和KCN对SOD的活力抑制表明，绿豆芽SOD为Cu、Zn—SOD。PAGE电泳图谱显示绿豆芽Cu、Zn—SOD由2个亚基组成。本研究结果将为绿豆芽SOD的开发利用提供理论参考。关键词：S

3、OD；绿豆芽；分离纯化；固定化；性质TheResearchonIsolationandPurification，InunobilizationandCharacterofMungBcanSproutsSODLIANGLi—qin，CHENGLin，LIji—bian，DUANJiang—yan(CollegeotLifeScience。ShanxiNormalUniversity，Linfen041004，Shanxi，China)Abstract：Inordertoreduceproductionc

4、ostsandimprovestabilityandutilization，themungbeansproutswereselectedastestedmaterialsandSODpurifiedthroughammoniumsulfatefrationationandDEAE——cellulosechromatographywasimmobilized．Theresultsshowedthatafterextractedwith0．05mol／LpH7．8PBS(containing0．1mol／

5、LMEDTA)．removedotherproteinwithammoniumsulfateof40％saturation，precipitatedwithammoniumsulfateof80％saturationandpurifiedwithDEAE—cellulosechromatography．theputrityofSODwas4．662×10kat／mgprotein．thetotalrecoveryrateofenzymeactivitywas43．7％andthepurificatio

6、ntimeswas26．4．Whentheconcentrationofpolyacrylamidewas22．5％．thecombinationeficiencyoftheimmobilizedenzymewas87．0％．andthetotalreeoveryrateofimmobilizedenzymeactivitywas80．9％．TheresultsofenzymeactivityinhibitionbyH，O，andKCNshowedthatmungbeansproutsSODwasCu

7、，Zn—SOD．PAGEelectrophoresisresultsshowedthatmungbeansproutsCu．Zn—S0DComprisedtwosubunits．ThestudyresultswilllaythefoundationforexploitingmungbeansproutsSOD．Keywords：superoxidedismutase；mungbeansprouts；isolationandpurification；immobilization超氧化物歧化酶(Super

8、oxidedismutase，EC1．15．1．1SOD势在必行；水稻、玉米、沙棘、大豆中的SOD提取纯简称SOD)能够催化超氧化物自由基歧化为O：与化目前已有较全面的研究ll_，而绿豆芽中的SOD提取H20，从而防止因超氧自由基在生物体内的过多积累纯化研究则较少；此外，天然SOD稳定性差，易失活，不而引起疾病或衰老，是一种具有重要生物医学意义的能重复利用，而固定化酶则可克服以上缺点，为此，以绿金属酶。据其活性部位结合金属离子的不同，目前生豆芽为材料提取