bFGF与EGF诱导BMSCs向神经干细胞分化的观察.doc

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1、bFGF与EGF诱导BMSCs向神经干细胞分化的观察作者：伦鹏孟庆海刘广义【关键词】bFGF［摘耍］目的探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、表皮生长因子(EGF)在体外条件下对骨髓基质干细胞(BMSCs)向神经干细胞(NSCs)和神经样细胞分化的诱导作用。方法采用出生4周左右大鼠的全骨髓细胞进行培养，传至第3代时，分为两组:实验组细胞加入bFGF和EGF,进行诱导分化；对照组不加因子继续培养。在倒置显微镜下每日观察、记录BMSCs的诱导分化情况，并应用免疫组化技术对细胞进行兔抗巢蛋白(Nestin)单

2、抗、兔抗神经元特异性烯醇化酶(NSE)单抗、兔抗胶质纤维酸性蛋白(GFAP)单抗鉴定。结果实验组诱导7d后有部分细胞具备神经元样细胞形态，胞体锥形或圆形，有较长单极或多极的突起，均有Nestin、NSE、GFAP阳性细胞表达，且3种细胞数量差别有显著性(t=3・266、6・099,P<0・05)。而对照组细胞仍为典型的成纤维细胞形态，无Nestin、NSE、GFAP阳性细胞。结论bFGF、EGF可以诱导BMSCs向NSCs分化，并可调控神经元分化，促进神经元细胞成熟。[关键词]骨髓细胞;干细胞;成纤

3、维细胞生长因子;表皮生长因子;巢蛋白[ABSTRACT]ObjectiveTostudywhetheradultbonemarrowstromalcells(BMSCs)couldbeinducedtodifferentiateintoneuralstemcel1s(NSCs)andneuronsbybasicfibroblastgrowthfactor(bFGF)andepidermalgrowthfactor(EGF)・MethodsAdultmarrowstromalcellswereculture

4、dfrombonemarrowoffourweekoldWistarrats・bFGFandEGFwereusedtoinducethethirdgenerationBMSCs,andcontrastedwiththecellsthathadnotbeeninduced・AphasecontrastmicroscopewasusedtoobservethedifferentiationofBMSCs,daily・Immunohistochemistrytechniquewasusedtoidentifyt

5、hedifferentiatedBMSCswithNestin,neuronspecificenolase(NSE)andglialfibri11aryacidprotein(GFAP).ResultsAftersevendaysofculture,someBMSCsappearedtypicalmorphologicalneuronaltraits:therefractileandconelikeorsphericalcellbodiesandlongprocesses,expressedNestino

6、rNSEorGFAP・Thethreekindsofcellsshowedsignificantdifferenee,butthecel1sinthecontrolgroupsti11hadnoNestinorNSEorGFAPexpression.ConclusionbFGFandEGFcouldinduceBMSCstodifferentiateintoNSCsandneurons,andmightregulatethedifferentiationandpromotethematurationofn

7、eurons<[KEYWORDS]bonemarrowcells；stemcells；fibroblastgrowthfactors;epidermalgrowthfactor;nidogen神经系统损伤后的修复是困扰神经科学的一大难题，神经干细胞(NSCs)的发现和移植治疗为解决此难题捉供了一条新的途径,并成为近年来的研究热点。然而，传统的胚胎来源和脑来源的NSCs由于取材困难，并受伦理道德的约束，使其应用受到极大的限制。骨髓基质干细胞(BMSCs)具有多分化潜能,可以在体外诱导生成骨骼肌细胞、心肌细胞

8、、成骨细胞、神经胶质细胞和神经元样细胞[1]。因此，使用来源于骨髓的NSCs治疗神经系统的变性、外伤或遗传性疾病将成为可能。而寻找和探索恰当的细胞因子和培养条件，将BMSCs诱导分化成合适的神经前体细胞，是神经细胞移植的前提条件。1材料和方法1.1材料出生4周左右Wistar大鼠，雌雄不拘，SPF级，体质量150g,由青岛市实验动物和动物实验中心提供。试剂包括:胎牛血清(GTBCO公司)；DMEM/F12培养液(GIBCO公司