全自动在线固相萃取-高效液相色谱法测定水体中痕量微囊藻毒素.pdf

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1、第39卷分析化学(FENX1HUAXUE)研究简报第8期2011年8月ChineseJournalofAnalyticalChemistry1256～1260全自动在线固相萃取一高效液相色谱法测定水体中痕量微囊藻毒素郭坚杨新磊叶明立’(中英HUST—RRes作物基因T程和基因组学联合实验室，科技部闰际科技合作地，教育部分子生物物理重点实验室，武汉430074)(湖北H；入境检验检疫局技术中心，武汉430022)(戴安上海分析仪器有限公一J，上海201023)摘要建立J，全自动化在线固相苹取～高效液相色谱法快速、准确测定水体中3种痕量微囊藻毒索的新方法。样品用自动进样器连续注入周相萃取小柱完成

2、富集后，通过双梯度高效液相系统中的‘个泵(』样泵)实现净化，再通过阀切换将固相萃取小柱切换至分析流路中，用个泵(分析泵)将待测物冲洗至分忻梓进行测定。方法使用AcclaimPA柱芯(1Omm×4．3mm×5m)为在线同相葶取小柁，AcclaimPA2托(150mm×4．6mm×3rtm)为分析柱，上样泵流速2．0mL／min，上样后采用梯度洗脱方式进干亍样品的净化，分析泵流速1．0mL／min，也以悌度洗脱方式完成做囊藻毒素的分离和检测。检测波长为238nm．进样体积为10mL，整个分析时间为20min。厅法在O．5410gg／L范围线性良好，3种微囊藻毒素的线性相关系数RllJ0．9996

3、，俭⋯限为0．1gg／L(s／N03)，6次平行测定峰面积RSD~．1．6％。实验证明本方法可有效地_L}j于水体中痕量微囊藻毒素的测定。关键词在线同相苹取；微囊藻毒素；高效液相色谱；双梯度系统l引言微囊藻毒素(Microcystins，MCs)是水体有害蓝藻水华释放出来的一类具有强致癌作用的肝毒素，迄今已发现60多种异构体。。已知存在的最普遍、含量相对较多、毒性较大的主要有M@LR，MC-RR，MYR3种。目前，我国《生活饮用水卫生标准)(GB／T574％2006)规定饮用水中的MC-LR含量不得高于lg／L脚，世界生组织(WHO)在其推荐的饮用水标准指导巾要求MC—LR含量不得高于1gg

4、／L。微囊藻毒素凶其在饮用水和湖泊水中的含量极低(一般低于1~tg／L)，常规HPLC检测时，须对样品进行大体积的离线同相萃取。GB／T204662006t巾将过滤后的1L水样通过同相萃取柱进行富集，用甲醇洗脱，然后将洗脱液挥干，定容至0．1mL50％(V／V)甲醇后再用HPLCuv检测，检m限为0．1g／L。梁丽丽等采用高效液相色谱法检测水体中微囊藻毒素。肖付刚等采用免疫亲和层析一液质涪联用方法检测蓝藻巾的微囊藻毒素。Lee等采用外加泵和六通阀方式实现了在线萃墩、富集水样中的痕量微囊藻毒素，由于样品通过外加泵注射到同相萃取小柱上，尢法实现样品连续自动分析，不同样品需要人清洗泵和六通阀后才能

5、继续分析。同时，由于外加泵不具备梯度洗脱功能，实际样品分析时1二扰较多。Shan等建立了一种新的在线微固相萃取毛细管液相色谱质谱方法(OnlinemicroSPELc～MS)测定了自来水和湖水中7种微囊藻毒素和1种节球藻毒素一R，由于采用高灵敏质谱检测器，方法检“1限可达56．6ng／L，但方法仪器配置昂贵，运行成本较高，不具备广泛推广价值。本研究利用双i元高效液相系统(Dualgradientliquidchromatography，DGLC)，采用在线固相萃取方式对样品进行富集后再用HPLC检测]，系统连接方式见图l。六通阀为仪器自带，同定于柱温箱内．阀切换通过色谱软件控制。样品先通过自

6、动进样器连续注入到在线固相萃取小柱上，冉用上样泵流动相进行梯度净化后通过阀切换用分析泵流动相将待测物冲洗至分析柱L进行分析。一待测物被冲在线同相萃取柱，阀再切换回初始状态，分析泵继续完成分析，富集泵将在线同相萃取柱进行冲洗和活20lIO卜24收稿；201卜O6—29接受Email：yangxinlei16@163com第39卷4。C保存待用，该溶液至少可放置60d。1．0mg／L微囊藻毒素混合标准溶液：分别从上述100mg／L标准储备液中移取1mL于100mL容量瓶中，用甲醇定容，摇匀，4℃保存待用，该溶液可至少放置60d。各浓度T作溶液：移取不同体积1．0mg／L微囊藻毒素混合标准溶液，用

7、去离子水配制成10．0，5．0和1．0gg／LT作溶液。再移取不同体积10．0lag／L溶液，用去离子配制成0．5和0．1g／L工作溶液待用，各浓度T作溶液每周配制一次。3结果与讨论3．1固相萃取柱和分析柱选择富集柱是在线固相萃取一高效液相色谱联用方法实验成败的关键。微囊藻毒素的富集多用C．材质的同相蒂取柱，张维吴等比较了6种品牌C．固相萃取柱，发现各萃取柱对微囊藻毒素的富集效果均很好，平均加标回收率均可达到