高效液相色谱法检测水体中微囊藻毒素论文

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1、高效液相色谱法检测水体中微囊藻毒素论文梁丽丽弓爱君李红梅曹艳秋李宝芹【摘要】建立了高效液相色谱检测水体中微囊藻毒素(Microcystins,MCs)的方法。选择XAD2树脂为富集树脂，采用四氯化碳10%乙醇10%丙酮连续淋洗，获得较好的杂质去除效果，采用90%甲醇可以将树脂柱上的MCs完全洗脱。HPLC采用V(0.1%TFA)：V(甲醇)=42∶58混合溶液为流动相进行等度洗脱，MCRR和MCLR取得较好分离效果,回收率均达到90%以上。水样富集2000倍后，方法的检出限为0.05μg/L。本方法操作简便、灵敏度高

2、、检测速度快。【关键词】微囊藻毒素;高效液相色谱1引言随着工农业的迅速发展以及污水排放量的增加,水体富养化日益严重,频繁暴发蓝藻水华，微囊藻毒素是在蓝藻水华污染中出现频率最高、产量最大、造成危害最严重的藻毒素。最常见的有微囊藻毒素RR(MicrocystinsRR,MCRR)和微囊藻毒素LR(MicrocystinsLR,MCLR)。MCs具有明显的肝毒性，会导致肝癌的发生。目前.freelaAmberlite公司);旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂);超纯水机(美国Millipore公司);0.45μm混合纤维素酯

3、微孔滤膜(天津津腾实验设备有限公司)。MCRR和、MCLR标准品(Alexis公司);甲醇和三氟乙酸均为分析纯。藻粉：北京市玉渊潭公园的水华蓝藻经干燥、粉碎制得。2.2色谱条件InerteilODS3色谱柱(416mm×250mm,5μm);柱温25℃,流动相：V(0.1%TFA)∶V(甲醇)=42∶58，流速：1mL/min,进样量：20μL,检测波长为239nm。2.3MCRR、MCLR标准曲线的绘制取MCRR和MCLR的标准品分别配成浓度梯度为5.0，10.0，20.0和25.0mg/L的标准溶液，在上述色

4、谱条件下用HPLC进行检测，以峰面积Y对标准品浓度X(mg/L)绘制标准曲线。2.4样品前处理2.4.1XAD2树脂的预处理取40gXAD2树脂，采用湿法装柱，柱床高约45cm，装柱后依次用甲醇和水清洗，除去杂质，赶走可能吸附于树脂上的空气泡，备用。2.4.2微囊藻毒素的富集与净化取2L水样，用滤纸过滤后，通过富集柱进行富集，依次用90mL四氯化碳、90mL10%乙醇和90mL10%丙酮连续淋洗，去除杂质后，用150mL90%甲醇溶液洗脱。将洗脱液旋转蒸发后用氮气吹至体积小于1mL，用纯甲醇定容至1mL，过0.45μm滤膜

5、，以HPLC检测。若不及时进样,将样品密封,置-20℃冰箱内保存。3结果与讨论3.1色谱分析条件的优化以甲醇TFA水体系作为流动相并进行等度洗脱,实验成本低，实验后色谱柱容易清洗，对实验人员的危害小。考察了流动相中0.1%TFA与甲醇的体积比(30∶70,40∶60,48∶52和50∶50)对分离的影响。结果表明,V(0.1%TFA)∶V(甲醇)=30∶70和40∶60，MCRR和MCLR的保留时间短,但在MCRR出峰处有干扰;V(0.1%TFA)∶V(甲醇)=50∶50,干扰不明显,但在35～40min内出峰才能完

6、成。V(0.1%TFA)∶V(甲醇)=48∶52，在25min内完成出峰，避开了MCRR出峰处的干扰。图1藻毒素的容量因子随甲醇比例的变化趋势将计算所得的MCs的容量因子对甲醇的浓度作图(图1)。从图1可以看出，MCLR比MCRR的容量因子大，柱子对前者吸附能力较强。藻毒素的容量因子受流动相中甲醇比例的影响，随着甲醇比例的增加，两种MCs的容量因子变小，并且MCLR较MCRR变化得更快。3.2洗脱液的选择根据文献报道以及实验结果中MCs的回收率和色谱峰的干扰情况，采用90%甲醇作为洗脱液。将藻粉用50%甲醇反复冻溶、

7、进行超声提取，得到藻毒素提取液，加水配制成20.6和7.1μg/L的模拟水样。将水样过XAD2树脂柱富集，用90%甲醇洗脱，每流出10mL洗脱液作为一个样品，图2MCRR和MCLR的洗脱曲线Fig.2ElutioncurvesofmicrocystinsRR(MCRR)andmicrocystinsLR(MCLR)连续收集，依次编号。将样品浓缩至1mL,用HPLC检测每个样品中MCs的含量，绘制MCRR和MCLR的洗脱曲线(图2)。由图2可见,90mL洗脱液即可完全洗脱MCRR和MCLR。考虑到实际水样中含有

8、的MCs可能高于模拟水样，本实验采用150mL90%甲醇作为洗脱液。3.3淋洗液的选择XAD2树脂富集柱在洗脱前用适当的淋洗液进行淋洗,可以减少杂质及其对分析的干扰。使用未检出MCs的天然水样添加蓝藻提取液配制成MCRR和MCLR分别为20.6和7.1μg/L的模拟水样