高效液相色谱法检测水体中微囊藻毒素.pdf

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1、第38卷分析化学(FENXIHUAXUE)研究简报第5期2010年5月ChineseJournalofAnalyticalChemistry740～742iDOl：lO．3724／SP．J．1096．2010．00740高效液相色谱法检测水体中微囊藻毒素梁丽丽弓爱君李红梅曹艳秋李宝芹(北京科技大学，北京10oo83)(中国计量科学研究院，北京1ooo13)摘要建立了高效液相色谱检测水体中微囊藻毒素(Microcystins，MCs)的方法。选择XAD一2树脂为富集树脂，采用四氯化碳一10％乙醇一10％丙酮连续淋洗，获得较好的杂质去除效果，采用90％甲醇可以将树脂柱上的MC

2、s完全洗脱。HPLC采用0．1％TFA)：V(甲醇)=42：58混合溶液为流动相进行等度洗脱，MC．RR和MC—LR取得较好分离效果，回收率均达到90％以上。水样富集2000倍后，方法的检出限为0．05L。本方法操作简便、灵敏度高、检测速度快。关键词微囊藻毒素；高效液相色谱1引言随着工农业的迅速发展以及污水排放量的增加，水体富养化日益严重，频繁暴发蓝藻水华，微囊藻毒素是在蓝藻水华污染中出现频率最高、产量最大、造成危害最严重的藻毒素。最常见的有微囊藻毒素一RR(Microcystins—RR，MC—RR)和微囊藻毒素一LR(Microcystins—LR，MC—LR)。MC

3、s具有明显的肝毒性，会导致肝癌的发生。目前，检测水体中MCs的常用方法有HPLC．uV法¨和Lc—Ms法胡。其中质谱法检出限低，测定结果准确，但是价格昂贵。由于天然水体中MCs的含量低，因此在进样检测之前需要对其进行富集，文献中主要采用固相萃取柱(SPE)和免疫亲和层析柱(IAC)进行富集，但是这些柱子成本过高，且不能重复使用。本研究采用XAD一2大孑L吸附树脂富集MCs，成本低，且树脂经活化后可以重复使用。本研究以MC．LR和MC—RR为对象，对色谱检测条件以及水样前处理过程中使用的富集柱、淋洗液和洗脱液进行了选择，建立并且优化了XAD-2树脂富集一HPLC—uV检测水

4、体中的微囊藻毒素的方法。2实验部分2．1仪器与试剂L7110型高效液相色谱仪(日本13立公司)；浙江大学N2000色谱工作站(浙江大学智达公司)；XAD一2树脂(SigmaAmberlite公司)；旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)；超纯水机(美国Millipore公司)；0．45Ixm混合纤维素酯微孔滤膜(天津津腾实验设备有限公司)。MC—RR和、MC—LR标准品(Alexis公司)；甲醇和三氟乙酸均为分析纯。藻粉：北京市玉渊潭公园的水华蓝藻经干燥、粉碎制得。2．2色谱条件InerteilODS3色谱柱(416him×250mm，5m)；柱温25℃，流动相：V(0．1％T

5、FA)：V(甲醇)：42：58，流速：1mL／min，进样量：20txL，检测波长为239nm。2．3MC-RR、MC-LR标准曲线的绘制取MC．RR和MC．LR的标准品分别配成浓度梯度为5．0，10．0，20．0和25，0mg／L的标准溶液，在上述色谱条件下用HPLC进行检测，以峰面积y对标准品浓度X(mg／L)绘制标准曲线。2．4样品前处理2．4．1XAD-2树脂的预处理取40gXAD-2树脂，采用湿法装柱，柱床高约45cm，装柱后依次用甲醇和水清洗，除去杂质，赶走可能吸附于树脂上的空气泡，备用。2009—10—15收稿；2009—12-29接受本文系国家标准物质资源

6、共享平台建设项目(No．2005DKA21501)和北京市教委产学研项目资助E—mail：gongaijun@sas．ustb．edu．ca第5期粱丽丽等：高效液相色谱法检测水体中微囊藻毒素7412．4．2微囊藻毒素的富集与净化取2L水样，用滤纸过滤后，通过富集柱进行富集，依次用90mL四氯化碳、90mL10％乙醇和90mL10％丙酮连续淋洗，去除杂质后，用150mL90％甲醇溶液洗脱。将洗脱液旋转蒸发后用氮气吹至体积小于1mL，用纯甲醇定容至1mL，过0．45m滤膜，以HPLC检测。若不及时进样，将样品密封，置一20℃冰箱内保存。3结果与讨论3．1色谱分析条件的优化以甲

7、醇．TFA．水体系作为流动相并进行等度洗脱，实验成本低，实验后色谱柱容易清洗，对实验人员的危害小。考察了流动相中0．1％TFA与甲醇的体积比(30：70，40：60，48：52和50：50)对分离的影响。结果表明，V(0．1％TFA)：V(甲醇)=30：70和40：60，MC．RR和MC．LR的保留时间短，但在MC—RR出峰处有干扰；v(o．1％TFA)：(甲醇)=50：50，干扰不明显，但在35～40min内出峰才能完成。V(0．1％TFA)：V(甲醇)=48：52，在25min子右内完成出峰，避开了MC—RR出峰处的干扰。