反复冻融-固相萃取-液相色谱串联质谱法测定蓝藻中5种微囊藻毒素.pdf

《反复冻融-固相萃取-液相色谱串联质谱法测定蓝藻中5种微囊藻毒素.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、第41卷分析化学(FENXIHUAXUE)研究报告第12期2013年12月ChineseJournalofAnalyticalChemistry1844—1850DOI：10．3724／SP．J．1096．2013．30393反复冻融-固相萃取一液相色谱串联质谱法测定蓝藻中5种微囊藻毒素王超“彭涛吕怡兵滕恩江(中国环境监测总站，北京100012)(扬州市环境监测中心站，扬州225007)摘要建立了反复冻融．固相萃取．液相色谱串联质谱法测定蓝藻中5种微囊藻毒素(MCs)的方法。水中蓝藻经0．45m混合纤维滤膜过滤分离，采用3次_20~C／37cC冻融，2次5

2、mL75％甲醇提取，末端封尾的C固萃小柱浓缩和10mL5％甲醇净化，选择C。色谱柱(50mmx2．1mm，1．7m)，以0．1％甲酸和0．1％甲酸一乙腈为流动相，梯度洗脱分离，采用多反应监测模式，外标法定量分析。5种MCs在1．25～50g／L内线性良好，相关系数大于0．995，仪器精密度(RSD)为3．0％一11．5％，方法检出限为0．05～0．2ng。在1、5和50ng的加标水平下，MCs的回收率分别为63．7％～100．4％(RSD为5．5％～13．1％)、72．6％～85．7％(RSD为3．1％～6．6％)和72．5％～8O．5％(RSD为2．6％

3、～8．3％)。应用本方法对南方某饮用水源地，开展连续5个月的胞内和胞外MCs监测。关键词微囊藻毒素；液相色谱质谱；蓝藻；冻融；固相萃取1引言随着淡水水体的富营养化日益严重，频繁发生的蓝藻水华对饮用水安全构成严重危险。微囊藻毒素(Microcystins，MCs)是由蓝藻中微囊藻属(Microcystis)、鱼腥藻属(Anabaena)、颤藻属(Oscillatoria)及念珠藻属(Nostoc)等经次生代谢产生的单环七肽化合物⋯，其典型的分子结构见图1。已鉴定出的60余种MCs皆由x和z位氨基酸的变化、肽环上甲基的变化或者Adda的结构变化而产生j，MC．

4、LR，MC—RR，MC—YR，MC．Lw和MC—LF(见表1)是蓝藻水华中分布广泛和毒性较大的MCs。流行病学研究显示，饮用水MCs暴露与肝损伤、肝癌等密切相关，目前MC—LR已被国际癌症协会(IARC)归为“对人类可能致癌”l5物质。世界卫生组织(WHO)规定饮用水中MC．LR控制浓度为1．0L¨6J，人群的最大可耐受摄入量为0．04g／(kg·d)71；中国规定饮用水中MC—LR的标准限值为1．0L。表15种微囊藻毒素(MCs)的结构信息和分子量Table1Structuralinformationandmolecularweightof5microc

5、ystins(MCs)MCs主要存在于蓝藻细胞内，当细胞死亡破裂时，胞内MCs才被大量释放到水体中，造成水质污染J。目前，水中MCs(胞外MCs)监测较为成熟，而胞内MCs的测定是环境监测中的难点问题。胞内MCs的前处理过程繁琐，包括蓝藻的收集、细胞破碎和浸提、MCs的浓缩和净化等步骤；而且蓝藻提取液基体复杂，MCs含量极低，如未得到充分净化，将抑制MCs的质谱离子化效率，影响色谱柱的寿命，增加仪器维护成本。目前国内关于胞内MCs检测的研究报道较少。蔡金傍等采用反复冻融一固相萃取一液相色谱法(HPLC)测定了北方某水库蓝藻中MC—RR，MC-YR和MC—L

6、R的含量。HPLC的检出限高2013-04-24收稿；2013-08-09接受本文系水体污染控制与治理科技重大专项(No．2013ZX07502001)资助项目E—mail：preparing@126．com第l2期王超等：反复冻融一固相萃取一液相色谱串联质谱法测定蓝藻中5种微囊藻毒素D．GluMdhaCO0HCH3OIHN＼NH：图1典型MCs的分子结构(以MC—LR为例，其中X和Z分别为亮氨酸和精氨酸)Fig．1MolecularstructureofgeneralMCs(MC—LRisshown，inwhichXandZrefertoLeucinea

7、ndArginine)(最低检出量为0．1txg)，且仅通过保留时间定性，易受复杂基体的干扰I’。吴伟文等采用固相微萃取HPLC法测定了水中2种微囊藻毒素。郭坚等采用全自动固相萃取一HPLC法测定水体中良量微囊藻毒素。肖付刚等采用超声波破碎／免疫亲和层析一液质联用法测定蓝藻中MC—LR和MC—RR的含量。有文献报道超声波可引起MCs降解，不推荐采用u。虽然免疫亲和层析具有高度的选择性，但是免疫小柱商品化不高，且容易失活，限制其广泛的使用_l。建立准确、灵敏的胞内MCs分析方法，对于预警水体MCs污染，保障饮用水安全具有重要意义。本研究对蓝藻中MCs的释放、

8、富集和净化过程以及仪器分析条件等进行了优化研究，建立了反复冻融．固