高效液相色谱-串联质谱法测定鲫鱼中的微囊藻毒素

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1、ApplicationNote:CM0038高效液相色谱-串联质谱法测定鲫鱼中的微囊藻毒素刘飞王勇为赛默飞世尔科技(中国)有限公司摘要：建立了高效液相色谱/串联质谱法(LC-MS/MS)对鱼体中MC-RR，YR，LR，LW，LF进行定量分析，建同时定量检测鲫鱼中微囊藻毒素(MC-RR，YR，LR，立了鱼体中MCs的高效液相色谱/串联质谱(LC–MS/MS)LW，LF)的方法，用甲醇提取鲫鱼中待测物，HLB(Oasis)分析方法，这些毒素可产生典型的离子谱，质谱仪对小柱固相萃取法净化，并对提取溶剂和淋洗液及分析藻毒素有最佳分辨效果，LC–MS/MS方法由于其优良KeyWords条件进行了优化。该

2、法检出限(LOD)为0.2μg/kg，定量的选择性，对样品的纯化步骤要求不高，能够在混合•微囊藻毒素限(LOQ)为0.7μg/kg，标准曲线的线性相关系数均大于物中同时实现多种藻类毒素的分离和鉴定。•TSQQuantum0.99，回收率为85.3%-101.3%，该方法操作简便且灵•鲫鱼敏度较高。实际鱼样未检测出MC-RR，YR，LR，LW，2实验部分LF。2.1仪器与试剂关键词：微囊藻毒素；TSQQuantum；鲫鱼液质联用仪由Surveyor液相色谱系统和ThermoFisherTSQ1引言Quantum三重四极杆串联质谱组成；氮气吹干仪(美近几十年由于水体富营养化程度的日益加剧，涉及范国

3、Zymark公司)；MilliQ去离子水发生器(美国Millipore公围不断扩大，包括水源水库水在内的淡水水体经常发司)；Sartorius冷冻离心机；WH-861漩涡混合器。生蓝藻水华。有害藻类水华的频繁发生已成为国内外二次去离子水；甲醇(色谱纯)；OasisHLB固相萃取普遍关注的环境问题。据2004年资料，已从不同藻株柱(Waters公司，60mg，3mL)；标准品：微囊藻毒[1]中分离、鉴定了70多种微囊藻毒素。在已发现的蓝素-LR(MC-RR)，微囊藻毒素-LF(MC-YR)，微囊藻毒藻毒素中，微囊藻毒(Microcystins，MCs)是一种在蓝藻素-YR(MC-LR)，微囊藻毒

4、素-RR(MC-LW)，微囊藻毒水华污染中出现频率最高、造成危害最严重的藻毒素素-LW(MC-LF)，纯度不低于95%；鲫鱼样品来自市场，[2]种类。冷冻保存于实验室。MCs的一般结构为环(D-丙氨酸-L-X-赤-β-甲基-D-异天分别准确称取标准品各10.00mg，至10mL棕色容量瓶，冬氨酸-L-Z-Adda-D-异谷氨酸-N-甲基脱氢丙氨酸)。其用甲醇定容，﹣20℃避光保存。再用甲醇稀释上述标中，Adda(3-氨基-9-甲氧基-2，6，8-三甲基-10-苯基-4准储备液，配制成1.0µg/mL的混合标准溶液，于4℃避，6-二烯酸)是一种特殊的氨基酸[3]。在已发现的MCs光保存1个月。异

5、构体中，MC-LR,RR,YR毒性最强(L、R、Y分别代表2.2样品前处理亮氨酸、精氨酸、色氨酸)。MCs是一种水溶性肝毒2.1.1提取素[4-5]，它对动物和人类健康的潜在危害逐渐引起关准确称取5.00g鲫鱼试样均匀样品于100mL离心管中，注。加入50μL标准MC-RR,YR,LR,LW,LF(1μg/mL)，于液体混由于藻毒素可通过食物链累积，供食用的水产品如鱼匀器(10000r/min)上快速混合1min，使标准与试样混合类、贝类等也可能携带藻毒素危害人类健康。为防止均匀，再加入10mL甲醇溶液，均质2min，超声15min，藻毒素对人类的进一步危害，需进行更广泛而深入的离心5min(

6、3000r/min)，将上清液转移到试管中，氮吹研究。目前WHO仅规定了饮用水中微囊藻毒素可耐受至约0.5mL，加水至约10mL。量1.0μg/L，及暂定的微囊藻毒素临时可耐受的每日摄2.1.2净化[6]取量0.04μg/(kg•dBW)，结合各国微囊藻毒素的安全分别用5ml甲醇、水活化HLB固相萃取小柱，流量为限量标准，微囊藻毒素每日安全摄入总量在2.4μg之内1-2mL/min。将上述混合物转移到HLB小柱上，控制流应是安全的。但鱼类等水产品中微囊藻毒素的限量还上样流速为1-2mL/min。用二次去离子水5mL淋洗，淋有待进一步的研究。鉴于微囊藻毒素对人体的危害，洗速度为1-2mL/min

7、，抽干，用甲醇溶液4mL洗脱，洗应逐步建立和完善水产品中MCs含量的检测方法，并脱流速约1mL/min，收集洗脱液于50℃氮吹，甲醇-水制定食品中MCs的限量。(甲醇：水=3：7)定容至1mL，过0.45μm的滤膜到进样瓶越来越多的分析技术用于MCs的检测当中，水体中中，供液相色谱-质谱仪测定。[7-8]MCs中的检测方法已相对较完善。本文报道了同时2.3液相色谱和质谱条件2.3.1液相色谱条件色