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1、武陵山羊肚菌液体培养条件优化研究•农学论文武陵山羊肚菌液体培养条件优化研究刘达玉1,王慧超2,郑林用3，戴玄2,李宗堂4,陈今朝2(1・成都大学生物产业学院，成都610106;2.长江师范学院生命科学与技术学院，重庆408100;3.四川省农业科学院，成都610066;4.成都榕珍菌业有限公司，成都611733)摘要：对武陵山羊肚菌(Morchellaesculenta)的液体培养条件、培养基进行了优化。结果表明，最适液体培养条件为pH6.0、培养液装量100mL/250mL、接种量8%、温度25°C.摇床转速180r/min、培养时间6d;
2、最适发酵培养基为4・0%蔗糖、0.70%酵母粉、0.15%K2HPO4和0・10%MgSO4・7H2O。在此条件下，菌丝体干重为6.880g/L,胞外多糖产量为0・861g/L。关键词：武陵山羊肚菌(Morchellaesculenta);液体培养；菌丝体；胞外多糖中图分类号：Q949.32文献标识码:A文章编号：0439・8114(2015)02・0405・04DOI:10.14088/j.cnki・issn0439.2015.02.037羊肚菌(Morchellaesculenta)是一种营养丰富、美味可口的珍贵食药用菌，其性平、味甘，益
3、肠胃、化痰理气，补肾、壮阳，补脑、提神,具有增强肌体免疫力、抗疲劳、抗衰老、降血脂、抗病毒和抑制肿瘤等功能［1,2L虽然国内外已有一些羊肚菌人工栽培的报道，但由于其对气候、土壤等环境条件要求苛刻，至今仍未实现规模化栽培［3・6I自然资源很少,远不能满足市场需求。为此，笔者分离重庆武陵山羊肚菌，并对其液体培养条件进行了优化，拟为其人工栽培、食品和药品开发提供依据。1材料与方法1.1材料菌种:武陵山羊肚菌,长江师范学院生物技术实验室分离保存。母种PDA培养基:20%马铃薯（去皮）煮汁，2.0%葡萄糖，0.30%蛋白月东，1・8%琼脂,0.10%K
4、2HPO4,0.05%MgSO4-7H2O,pH自然［7L液体种子培养基：10%马铃薯煮汁，2.0%葡萄糖，0.50%蛋白月东,0.10%K2HPO4,0.05%MgSO4,pH6.0[8」发酵培养基：4.0%葡萄糖，0.50%蛋白月东，0.10%K2HPO4,0.05%MgSO4-7H2O#pH6.0。1・2方法1.2.1菌种活化把保藏的羊肚菌母种转接到无菌PDA培养基平皿上，25°C培养7d，备用。1.2.2液体培养方法将种子培养液装入250mL锥形瓶中，每瓶100mL;0.10MPa、121.3°C灭菌20min,冷却，接羊肚菌母种于锥
5、形瓶中,160r/min.25°C培养3d备用［9L发酵培养液装量同种子培养液,培养条件相同,培养时间6d。1・2.3发酵培养基选择选取蔗糖、酵母粉、K2HPO4.MgSO4-7H2O4个因素，设计L9（34）正交试验，因素与水平见表1。通过试验，筛选最佳培养基配方。表1因素与水平因索〃％蔗糖⑷酵母粉（〃）MgSO4-71U)(D)1350.300.050.050厶4.00.500.100.1034.50.700.150.151.2.4菌丝体干重测定取发酵液30mL,在4000r/miri离心10min，沉淀菌丝体用去离子水洗涤3次，于70°
6、C下烘干至恒重,称重,每个处理重复3次。1・2.5羊肚菌胞外多糖测定参照武秋立等［10］的方法,取岀菌丝体羊肚菌发酵液加入3倍乙醇于0°C下沉淀12h,于4000r/min离心10min;弃上清液,沉淀加少量乙醇再离心，重复两次后，将沉淀用去离子水溶解走容，用硫酸■蔥酮法于620nm处测吸光度,根据硫酸・蔥酮葡萄糖标准曲线计算胞外多糖产量。1・2.6数据处理试验数据用DPS7.05版软件处理，用LSD法比较菌丝体干重和多糖的差异显著性。2结果与分析2.1液体培养条件选择2.1.1pH对菌丝体干重和多糖产量的影响用2.0mo1/LHCI或氢氧化
7、钠溶液调节培养液pH分别为4・0、5.0、6・0、7.0、8.0,接种培养（表2L当pH6.0时，菌丝体生长最快，其干重和胞外多糖产量均最高；pH6.0与pH7.0菌丝体干重之间差异不显著，而pH6.0与pH5.0胞外多糖产量之间差异极显著；当pH4.0时，菌丝体干重及多糖产量均最低。可见，菌丝体生长、多糖形成的最适pH为6・0。表2pH对菌丝体干垂和多糖产量的影响PH菌丝体干i//^L胞外参糖〃”L4.00.857bB0.281eE5.04.910aA0.574hB6.05.054aA0.65()aA7.04.931aA0.5322：8.0
8、4.890aA0.394dD注:同列不同小写字母表示/><0.05的显苦水¥，大芻字母表示P<0.01的极显苦水平。下同。2・1・2培养液装量对菌丝体干重和多糖产量
