武陵山羊肚菌液体培养条件优化研究

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1、武陵山羊肚菌液体培养条件优化研究刘达玉１，王慧超２，郑林用３，戴玄２，李宗堂４，陈今朝２（１．成都大学生物产业学院，成都６１０１０６；２．长江师范学院生命科学与技术学院，重庆４０８１００；３．四川省农业科学院，成都６１００６６；４．成都榕珍菌业有限公司，成都６１１７３３）摘要：对武陵山羊肚菌（Ｍｏｒｃｈｅｌｌａｅｓｃｕｌｅｎｔａ）的液体培养条件、培养基进行了优化。结果表明，最适液体培养条件为ｐＨ６．０、培养液装量１００ｍＬ／２５０ｍＬ、接种量８％、温度２５℃、摇床转速１８０ｒ／ｍｉｎ、培养时间６ｄ；最适发酵培养基为４．０％蔗糖、０．７０％酵母粉、０．１

2、５％Ｋ２ＨＰＯ４和０．１０％ＭｇＳＯ４·７Ｈ２Ｏ。在此条件下，菌丝体干重为６．８８０ｇ／Ｌ，胞外多糖产量为０．８６１ｇ／Ｌ。.jyqkL三角瓶分别装６０、８０、１００、１２０、１４０ｍＬ培养液（表３）。当培养液装量为１００ｍＬ时，菌丝体干重、多糖产量均最高；当装量为１４０ｍＬ时菌丝体干重、多糖产量均最低。因此，最适装量为１００ｍＬ。２．１．３接种量对菌丝体干重和多糖产量的影响培养液接种量分别为４％、８％、１２％、１６％、２０％（表４）。当接种量８％时，菌丝体干重、多糖产量均最高；接种量８％与１２％菌丝体干重、多糖产量之间均差异极显著；接种量２０％时，菌

3、丝体干重、多糖产量均最低。可见，最适接种量是８％。２．１．４温度对菌丝体干重和多糖产量的影响培养温度分别为２１、２３、２５、２７、２９℃（表５）。在２５℃时，菌丝体干重、多糖产量均最高；在２１℃时，菌丝体干重、多糖产量均最低。可见，最适培养温度是２５℃。２．１．５转速对菌丝体干重和多糖产量的影响将培养液置于摇床上振荡培养，转速分别设置为１４０、１６０、１８０、２００、２２０ｒ／ｍｉｎ（表６）。当转速为１８０ｒ／ｍｉｎ时，菌丝体干重最重，１８０、２００ｒ／ｍｉｎ菌丝体干重之间差异显著；当转速为２００ｒ／ｍｉｎ时，多糖产量最高；而２００、１８０ｒ／ｍｉｎ多

4、糖产量之间差异不显著。因此，最适转速为１８０ｒ／ｍｉｎ。２．１．６培养时间对菌丝体干重和多糖产量的影响培养液分别培养４、５、６、７、８ｄ（表７）。当培养６ｄ时菌丝体干重最重，培养６ｄ与７ｄ菌丝体干重之间差异极显著；培养８ｄ时多糖产量最高，培养８ｄ与７ｄ多糖产量之间差异不显著，而培养７ｄ与６ｄ多糖产量之间有极显著差异。因此，最适培养时间为６ｄ。２．２发酵培养基选择２．２．１碳源对菌丝体干重和多糖产量的影响分别用４．０％可溶性淀粉、蔗糖、甘露醇和麦芽糖代替发酵培养基中的葡萄糖为碳源（表８）。结果菌丝体干重在蔗糖培养基中最重，在可溶性淀粉培养基中最轻；多糖产

5、量在可溶性淀粉培养基中最高，在麦芽糖培养基中最低。综合菌丝体干重和多糖产量，选蔗糖为最适碳源。２．２．２氮源对菌丝体干重和多糖产量的影响分别用０．５０％牛肉膏、酵母粉、硫酸铵和尿素代替发酵培养基中的蛋白胨（表９）。菌丝体干重、多糖产量在酵母粉培养基中均最高，二者在尿素培养基中均最低。因此，酵母粉是最适氮源。２．２．３无机盐对菌丝体干重和多糖产量的影响分别用０．１０％Ｋ２ＨＰＯ４、ＣａＳＯ４·０．５Ｈ２Ｏ、ＭｇＳＯ４·７Ｈ２Ｏ、ＭｎＳＯ４·Ｈ２Ｏ、ＺｎＳＯ４·７Ｈ２Ｏ代替发酵培养基中的Ｋ２ＨＰＯ４和ＭｇＳＯ４·７Ｈ２Ｏ（表１０）。在只有Ｋ２ＨＰＯ４培养基

6、中菌丝体干重、多糖产量均最高，但在Ｋ２ＨＰＯ４与ＭｇＳＯ４·７Ｈ２Ｏ培养基中菌丝体干重、多糖产量之间差异不显著；在ＺｎＳＯ４·７Ｈ２Ｏ培养基中菌丝体干重、多糖产量均最低。因此，最适无机盐是Ｋ２ＨＰＯ４。２．２．４正交试验结果由表１１可知，以菌丝体为指标的培养基最优配方为Ａ２Ｂ３Ｃ３Ｄ２；以多糖为指标的培养基最优配方为Ａ２Ｃ３Ｄ3Ｂ2；两者结合并合并主次顺序选Ａ２Ｂ３Ｃ３Ｄ２，即４．０％蔗糖、０．７０％酵母粉、０．１５％Ｋ２ＨＰＯ４、０．１０％ＭｇＳＯ４·７Ｈ２Ｏ。但该培养基配方不在正交试验列表中，用该培养基配方进行验证试验，结果菌丝体干重为６．８８０ｇ

7、/Ｌ，胞外多糖为０．８６１ｇ/Ｌ。３小结武陵山羊肚菌的最适液体培养条件为ｐＨ６．０、２５０ｍＬ锥形瓶培养液装量为１００ｍＬ、接种量８％、温度２５℃、摇床转速１８０ｒ／ｍｉｎ，培养时间６ｄ。最适液体发酵培养基为４．０％蔗糖、０．７０％酵母粉、０．１５％Ｋ２ＨＰＯ４、０．１０％ＭｇＳＯ４·７Ｈ２Ｏ。在此优化条件下，菌丝体干重为６．８８０ｇ／Ｌ，多糖产量为０．８６１ｇ／Ｌ，菌丝体干重、胞外多糖产量分别比正交试验表中的最优配方Ａ２Ｂ３Ｃ１Ｄ２高９．７１％和１９．０９％。..