新生大鼠HIBD后海马Tau蛋白及p-tau蛋白的表达与细胞凋亡的关系.pdf

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1、At11esissubmittedtoZheng出ouU，niVersityforthedegreeofMasterI沁lationshipbetweentheexpressionof11auproteinandp—tauprOteinandapoptosisinthehippOcampusofhypoxic-ischemicneonatalByDongxiuZHANGSupervisor：Prof．JunW．angPediatricsRehabilitationMedicineTheT11irdC1

2、inicalCollegeApril，2014学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。学位论姗张冬秀日期：巾。仁年／月／口日学位论文使用授权声明本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国

3、家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权郑州大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。学位论文作者：殛毒鸯日期：矽，妒年占月p日摘要新生大鼠⋯BD后海马Tau蛋白及p—tau蛋白的表达与细胞凋亡的关系研究生：张冬秀导师：王军教授专业：康复医学与理疗学郑州大学第三临床学院河

4、南郑州450052目的通过制作新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)模型，观察HIBD后不同时间点海马区1’au蛋白、磷酸化1孤(p．t肌)蛋白和凋亡相关蛋白Bd-2、Ba)【及神经细胞凋亡的表达情况，研究其相关性，探讨1'au蛋白和p—tau蛋白与HmD后脑细胞凋亡的关系，以期为HIBD发病机制的分析和临床干预提供一定的指导。方法新生7日龄清洁级SD大鼠56只，随机分为正常对照组8只、假手术组8只和HIBD组(按处死时间点分为3、6、12、24、48h5个亚组)40只。每个亚组各8只动物。HIBD组参

5、照黜ce法建立HIBD动物模型，观察造模前后动物行为学改变，在不同时间点断头取脑。假手术组仅暴露左颈总动脉，不结扎，不缺氧，手术结束立即断头取脑。正常对照组未进行手术及缺氧处理，与假手术组同时间处死取脑。脑组织经常规固定、石蜡包埋、切片，采用苏木精一伊红(HE)染色观察海马区形态结构改变，免疫组化染色检测Tau蛋白、p．tau蛋白、Bcl．2、Ba)【的表达，原位切口末端标记法(TuNEL)检测神经细胞凋亡。数据以；土s表示，酣髑17．0统计软件进行分析，多组问比较时，符合正态分布、方差齐性，采用单因

6、素方差分析，组间差异有统计学意义者用最小显著差(LDS)法进行两两比较；非正态分布、方差不齐时则用秩和检验；1'au蛋白、p—tau蛋摘要白与Bcl-2、Ba)【、凋亡细胞表达的相关性分析采用Pearson或Spearson相关分析法，以a=O．05为检验水准。结果1动物模型的鉴定：HmD组新生大鼠缺血缺氧后出现不同程度的行为异常，如头颤、肢体抖动、站立不稳、翻身困难、夹尾左旋、甚至抽搐。HE染色示HIBD后海马区神经细胞出现肿胀、变性、坏死，核固缩、碎裂，细胞排列紊乱，神经元数目减少。2免疫组化结果

7、：1'au蛋白、p．tau蛋白、Bcl．2、Ba)【阳性染色均呈棕黄色或深棕色颗粒沉积，着色部位位于神经元胞浆或突起，前两者阳性表达主要见于齿状回，后两者在海马区广泛表达。①1撕蛋白：正常对照组和假手术组可见少量Tau蛋白阳性细胞，HmD后3hTau蛋白表达增强，阳性细胞数增加，24h达高峰，之后稍降，但仍多于正常对照组和假手术组：③p．t锄蛋白：正常对照组和假手术组可见少量p．tau蛋白阳性细胞，HmD后3h阳性细胞开始增多，逐渐增加，12h达高峰，之后渐降，HIBD后48hp．tau蛋白表达水平与

8、正常对照组和假手术组基本相同；③Bcl一2：正常对照组和假手术组未见明显Bcl．2阳性细胞，HIBD后3hBcl．2表达增强，阳性细胞数增加，24h达高峰，之后渐降，但仍多于正常对照组和假手术组；④Ba】【：BaX在正常对照组和假手术组的表达水平较低，HⅢD后3h表达开始增强，至48h达高峰，HmD组各时间点阳性细胞数均多于正常对照组和假手术组。3TUNEL检测凋亡细胞：凋亡阳性细胞在正常对照组和假手术组表达极少，HmD后3h可见凋亡阳性细胞数增加，24