nmdar亚单位1在ad样大鼠海马的表达及其与细胞凋亡的关系的论文

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1、NMDAR亚单位1在AD样大鼠海马的表达及其与细胞凋亡的关系的论文nmdar亚单位1在ad样大鼠海马的表达及其与细胞凋亡的关系【关键词】nmda受体亚单位1;细胞凋亡;阿尔茨海默病;大鼠;海马【摘要】目的探讨n甲基d天门冬氨酸受体(nmethyldaspartatereceptor，nmdar，nr)亚单位1在阿尔茨海默病(ad)样大鼠海马的表达及其与细胞凋亡的关系。方法以aβ140和alcl3双干预的方法建立ad样大鼠模型。应用免疫组织化学法检测nr1在ad样大鼠海马的表达，tunel法检测ad样大鼠海马细胞凋亡情况，并观察二者的关系。结果nr1在ad样大鼠海马各区的表达均升高

2、，与对照组相比有显著性差异(p<0.05)，区间比较未见显著性差异。凋亡阳性细胞在ad样大鼠海马各区均显著增多尤以ca1区为甚、其次为齿状回，与对照组比，差异有统计学意义(p<0.05)。结论nr1在ad样大鼠海马表现为病理性的高表达且这种病理性高表达和ad样大鼠海马的细胞凋亡以及选择性易损伤现象之间可能存在着某种特定的关系。【关键词】nmda受体亚单位1;细胞凋亡;阿尔茨海默病;大鼠;海马　阿尔茨海默病(ad)发病机制的β淀粉样蛋白(aβ)级联反应假说认为，aβ的生成和蓄积是ad发病的中心环节〔1～3〕。氧化损伤，谷氨酸(glu)兴奋毒性，老年斑(sp)和神经原纤维缠结(nft)

3、的形成以及细胞死亡级联反应的激活等，都被视为是继发于aβ生成和聚积的后续事件〔4，5〕。.ad可能与活动亢进的神经元有关，并且这些活动亢进的神经元最密集地集中在病变脑组织中淀粉样斑块沉积处的附近并且与疾病的症状相关联〔6〕。glu兴奋毒性通路在这个假说的数条主要信号通路中可能处于极其重要的地位，可能是引发ad患者神经细胞变性和死亡的一种重要机制。病理性胞浆ca2+超载主要是由n甲基d天门冬氨酸受体(nmethyldaspartatereceptor，nmdar，nr)所介导，而nr1是ca2+通道的主要调节者，是nmdar介导glu兴奋毒性的主要组分〔7〕。目前对ad样细胞凋亡的确

4、切机制仍不明确，至于nr1与ad样细胞凋亡的关系尚未见文献报道。本课题应用免疫组化和tunel染色的方法，研究nr1在ad样大鼠海马的表达及其与细胞凋亡的关系。　　1材料与方法　　1.1主要试剂和仪器　　aβ140，alcl3(美国sigma);山羊多克隆抗nr1抗体(美国santacruz);总抗山羊igg抗体(英国abcam);浓缩型二氨基联苯胺(dab)试剂盒(北京中杉);原位末端凋亡法(tunel)试剂盒(德国roche);碱性磷酸酶显色试剂盒(bcip/nbt，上海碧云天)。sr5r型脑立体定位仪(日本成茂);石蜡切片机(德国leica);显微摄影系统(日本奥林巴斯);图像分析

5、软件(美国mediacyberics)。　　1.2方法　　1.2.1实验动物及分组　　健康雄性老年sd大鼠45只，体重570～620g，徐州医学院实验动物中心提供(实验动物许可证号：苏syxk20020038)。实验大鼠经训练和筛选后，随机分为ad模型组、生理盐水(ns)组和正常对照组(nc)，每组15只。　　1.2.2大鼠训练和筛选　　所有参与实验的大鼠用morris水迷宫系统进行训练和筛选。4次/d，连续5d。将大鼠面向池壁分别从4个入水点放入水中，记录其在2min内找到平台的时间(逃避潜伏期)。如果在2min内大鼠未能找到平台，则由实验者将其牵引至平台上并让其停留20s，再放回笼中，始

6、终不能找到平台的大鼠将被剔除。　　1.2.3ad样大鼠模型制备　　模型组大鼠用10%水合氯醛(0.5ml/100g)麻醉后，将其固定在鼠脑立体定位仪上，参照文献〔8〕选取侧脑室立体定位坐标(以前囟为参照，旁开1.4mm，后0.8mm，深3.6mm)。将微量注射器缓缓插入到定位好的坐标，缓慢注射0.5mg/ml的aβ14030μl〔aβ140用0.01mol/l磷酸盐缓冲液(pbs)配制成0.5mg/ml的溶液〕，在5min内注射完，留针10min;然后缝合皮肤并用碘伏消毒。ns组在侧脑室内注射等量生理盐水。单笼饲养直至大鼠完全清醒，昼夜(12/12h)节律光照，自由进食饮水，室温控制在20

7、℃～25℃。从第5天开始，以100mg/kg的剂量隔日腹腔注射3%alcl3(ns配置)，持续4l/100g体重)腹腔麻醉大鼠，经心升主动脉插管灌注固定。取包含海马的脑块常规后固定、梯度酒精脱水、二甲苯透明，然后浸蜡、石蜡包埋。取包埋之脑块作连续冠状切片，片厚6μm;切片分6套，分别进行nr1免疫组化、tunel、刚果红及苏木素伊红(he)染色和阴性对照染色。　　1.2.5免疫组织化学染色