神经生长因子对新生大鼠hibd后海马区凋亡相关蛋白表达的影响

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1、神经生长因子对新生大鼠HIBD后海马区凋亡相关蛋白表达的影响　　【Abstract】AIM:Toinvestigatetheeffectsofnervegropusofneonatalratsfolloicbraindamage(HIBD),anditsmolecularbiologicalmechanism.METHODS:Seventytlydividedintocontrolgroup,HIBDgroupandNGFgroup.TheratmodelsofHIBDodifiedRICEmethod.Immunohistochemistrya

2、ndTUNELstainingployedrespectivelytodetecttheexpressionsofBcl2andBaxandthenumberofapoptotichippocampalneurons.RESULTS:MoreorlessapoptoticneuronscouldbeobservedinhippocampusinHIBDgroupandthelevelofBcl2expressioninistration,thenumberofapoptoticneuronsarkably(P<0.01)asparedin

3、istrationofNGFmayincreaseBcl2expressionanddecreaseBaxexpressionafterHIBDinneonatalrats,thusinhibitingtheapoptosisinhippocampus.　　【Keyia,brain;braininjuries;hippocampus;apoptosisrelatedprotein　　【摘要】目的：应用新生大鼠缺氧缺血性脑损伤（HIBD）模型，观察神经生长因子对海马区细胞凋亡及相关蛋白Bcl2和Bax的影响，探讨其神经保护作用的分子生物学机制.

4、方法：72只大鼠随机分为对照组、HIBD组和NGF治疗组.应用改良RICE法制作大鼠HIBD模型，TUNEL法检测各组动物海马区细胞凋亡数，免疫组化染色观察Bcl2,Bax蛋白的表达.结果：与假手术组相比，新生大鼠HIBD后海马区存在不同程度的细胞凋亡，Bcl2表达轻度升高，Bax表达明显升高.与HIBD组比较，NGF治疗后，凋亡细胞减少（P<0.01），Bcl2蛋白表达升高（P<0.01），Bax表达下降（P<0.01）.结论：HIBD后，新生大鼠海马区细胞存在细胞凋亡，NGF治疗增强Bcl2表达，减少损伤基因Bax表达

5、，抑制细胞凋亡，具有脑保护作用.　　【关键词】神经生长因子；缺氧缺血，脑；脑损伤；海马；凋亡相关蛋白　　0引言　　缺氧缺血性脑损伤(hypoxicischemicbraindamage,HIBD)是由于宫内窘迫、新生儿窒息等引起的新生儿脑部严重损伤，有较高的发病率和死亡率,也是导致智能落后和脑性瘫痪等儿童伤残的主要原因［1］.HIBD发病机制复杂，涉及多个环节，而凋亡是后期神经细胞缺失和功能障碍的主要原因.细胞凋亡持续时间较长，适当的治疗可逆转凋亡的病理过程而改善预后.本实验应用新生大鼠HIBD模型，以神经生长因子(nervegroicencep

6、halopathy,HIE)提供理论依据.　　1材料和方法　　1.1材料新生7d龄SD大鼠72只，雌雄不拘，体质量11～16g，由第四军医大学医学动物实验中心提供.注射用鼠神经生长因子(NGF恩经复)（厦门北大之路生物工程公司）；兔抗大鼠Bcl2多克隆抗体，小鼠BaxmAb，免疫组化染色SP试剂盒，细胞凋亡检测试剂盒（武汉博士得生物工程公司）.　　1.2方法　　1.2.1动物模型制备参照文献［2］制作HIBD模型：大鼠乙醚麻醉后，游离左颈总动脉并永久结扎，术后水浴箱恢复1h，再置于37℃自制缺氧舱中，以3L/min速度持续输入含80ml/L氧气的

7、氮氧混合气体2h，制成HIBD模型.　　1.2.2动物分组大鼠随机分为3组：①对照组：24只（假手术处理，仅游离左颈总动脉，不结扎亦不缺氧）；②HIBD组：24只，RICE法制备HIBD模型后腹腔注射生理盐水，间隔24h，连用7d；③NGF组：24只，HIBD模型后即刻以NGF1000U/kg腹腔注射，间隔24h，连用7d.　　1.2.3脑组织病理学测评HIBD后6,24,72h和7d时间点取脑，参照图谱，取含海马脑组织，行4μm连续冠状切片.HE染色，光镜下观察海马区细胞层结构；取与HE相邻切片，TUNEL染色，计数海马区凋亡细胞数；每一标本取2

8、张切片，每张切片取6个视野(CA1区3个视野，CA3区3个视野)，取两张切片的均值作为该标本结果，以该组6例样本均值作为该