中药复方962胶囊对老年大鼠海马区神经生长因子及其受体表达的影响

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1、中药复方962胶囊对老年大鼠海马区神经生长因子及其受体表达的影响摘要 目的:在老年性痴呆的发病中,年龄是最主要的危险因素,随年龄增长,发病率显著增高,自然衰老大鼠模型是比较接近老年性痴呆病理改变的动物模型。我们以往的实验证明:中药复方962胶囊(含何首乌、石葛蒲等六味中药)能显著改善老年大鼠学习记忆功能。本研究观察中药复方962胶囊对自然衰老大鼠模型海马CAI—CA4区神经生长因子(NGF)及其受体TrKA表达的影响,探讨中药复方962胶囊治疗改善学习记忆功能的作用机理。方法:雌性Wistar大鼠老年为22月龄,青年为5月龄。阳性对照药为脑复康(piracetam)0.56g/kg,中药复方9

2、62胶套高剂量1.8g/kg,962胶囊低剂量0.9g/kg,每日灌胃给药一次,连续灌胃2个月,进行学习记忆实验(水迷宫)和旷场分析后,每组随机选取5只,灌注固定,冰冻切片,片厚40μm,每份标本均ABC法行NGF和TrKA免疫组化染色。采用法国NoesisVision公司VISILOG5.0图象分析系统对组织切片进行分析。显微镜放大倍数为10×10,在海马CAl区锥体细胞层连续摄取3个视野,这三个视野包括了整个CAl区,记数3个视野内总阳性细胞数量、阳性细胞总面积(象素单位)及阳性细胞灰度积分值(灰度单位)。海马CA2区连续摄取2个视野,海马CA3区连续摄取2个视野,海马CA4区摄取齿状回包

3、含的1个视野,包括了整个CA2、CA3、CA4区。数据用均数±标准差表示(M±SD),结果采用t检验。结果:①32老年大鼠海马CAl、CA2、CA3、CA4区NGF表达较青年对照明显减少,阳性细胞数量为青年对照的19.89%,11.46%,6.65%和26.32%;阳性细胞总面积为青年对照的13.97%,6.76%,5.19%和25.01%;阳性细胞灰度积分值为青年对照的41.05%,35.49%,16,74%和29.17%。海马CAl、CA2、CA3、CA4区神经生长因子受体TrkA表达较青年对照也明显减少,阳性细胞数量为青年对照的12.42%,7.07%,9.26%和29.33%;阳性细胞

4、总面积为青年对照的7.61%,4.92%,5.62%和23.79%;阳性细胞灰度积分值为青年对照的29,30%,18.70%,17.51%和34.19%。以CA2、CA3区的减少最严重。⑦中药复方962胶囊和脑复康均能提高老年大鼠海马CAl一CA4区NGF和TrkA阳性细胞数量、阳性细胞总面积和阳性细胞灰度积分值,962胶囊高剂量组基本恢复青年对照组水平。结论:老年大鼠神经生长因子(NGF)及其受体TrkA在海马区表达明显减少,可能与其学习记忆能力下降有关;中药复方962胶囊能够明显促进老年大鼠海马区NGF及受体TrKA表达,可能是改善其学习记忆功能的药理学基础。增强内源性神经营养物质的表达对

5、老年性疾呆的治疗有重要意义。关键词 中药 老年 大鼠神经生长因子 TrKA受体前 言  老年性疾呆(Alzheimer’32sdisease。AD)是一种老年神经退行性疾病,临床以进行性记忆障碍和后天获得性知识丧失为特征,原因不明,尚元有效的治疗方法。自然衰老大鼠模型是比较接近老年性痴呆病理改变的动物模型。我们以往的实验证明:我室自行组方并研制的新复方962胶囊(含何首乌、石葛蒲等六味中药)能显著改善老年大鼠学习记忆功能。神经生长因子(nervegrowthfactor,NGF)在调节神经元生长和存活方面起着重要作用,AD过程中神经元的丢失至少部分是由于神经营养因子的缺乏。本文观察自然衰老大鼠

6、脑内是否发生神经生长因子(NGF)及其受体TrkA表达的变化,以及962胶囊对内源性NGF及其受体TrkA表达的影响,探讨962胶囊改善学习记忆功能的作用机理。  材料和方法1药品: 中药复方962胶囊,委托北京第四制药厂加工提供,批号:980515,每克干粉含生药量6.25克。实验时采用水溶解,动物灌胃量10m1/kg。阳性对照药品:脑复康(piracetam),由北京市曙光制药厂提供,批号:970618,京卫药准字(1996)第138050号。实验时用水溶解配成0.056g/m1。2动物: Wistar大鼠雌性,老年大鼠为22月龄(体重330±32g),青年为5月龄(体重325±19g)。

7、购于北京医科大学动物中心,动物证号:医动字01—3056。3试剂与主要仪器: ABC试剂盒、神经生长因子(NGF)兔抗鼠抗体、酪氨酸蛋白激酶受体A(TrkA,主要为NGF的受体)兔抗鼠抗体均购自北京中山试剂公司;恒温冷冻切片机为英国山盾公司ASE—620型,光学显微镜为NikonTE300型,图象分析系统为法国NoesisVision公司VISIUG5.0。324方法:  (1)分组与给药:分组情

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