微生物检验技术项目八 九 十 .pptx

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1、项目八微生物的计数技术微生物检验技术细胞数量的测定1项目八微生物的计数技术细胞生物量的测定2项目八微生物的计数技术了解微生物的各种计数方法、原理及适用范围；掌握血球计数板的计数方法；掌握菌落计数规则、计算方法。知识目标项目八微生物的计数技术能根据工作目标选择合适的计数方法；具备在显微镜下直接计数的技能；能够运用平板菌落计数法完成细菌总数的测定能力目标项目八微生物的计数技术微生物生长情况可以通过测定单位时间里微生物数量或生物量的变化来评价。背景知识一、细胞数量的测定1.直接测数法（或总菌数测定法）本法仅适用于单细胞的微生物类群。图8-1血细胞计数板正面与侧面及计数室的网络线示意图

2、１.计数板的正面与侧面图　２.中央方格网的大格为计数室一、细胞数量的测定图8-2高倍镜下的计数室与计数中格的选择示意图1.计数室为25中格（16小格）型2.计数时选取4角与中央中格一、细胞数量的测定2.稀释平板计数法（或活菌计数法）本法是迄今仍广泛采用的主要活菌计数方法，此法还常用于微生物的选种与育种、分离纯化及其它方面的测定。一、细胞数量的测定3.最大可能数计数法（又称液体稀释培养计数法）本法适用于测定在一个混杂的微生物群中虽不占优势，但却具有特殊生理功能的类群。本法的原理和操作要点是：将待测样品作一系列稀释，获得一批连续稀释度的样品稀释液。一、细胞数量的测定4.比浊法根据在

3、一定的浓度范围内，菌悬液中的微生物细胞浓度与液体的光密度成正比，与透光度成反比。本法常用于观察和控制在培养过程中的微生物的菌数消长情况。如，细菌生长曲线的测定和发酵罐中的细菌生长量控制等。其优缺点与直接测数法相同。一、细胞数量的测定5.浓缩法(膜过滤法)本法适用于检测微生物数量很少的水和空气等样品。测定时让定量的水或空气通过特殊的微生物收集装置(如微孔滤膜等)，富集其中的微生物，然后将滤膜干燥、染色，并经处理使膜透明，再在显微镜下计算膜上（或一定面积中）的细菌数。或将收集的微生物洗脱后测数，再换算成原来水或空气中的数量。二、细胞生物量的测定1.细胞干重法将单位体积的微生物培养液

4、经离心收集并用水反复洗涤菌体，经常压或真空干燥后精确称重，即可计算出培养物的总生物量。二、细胞生物量的测定2.总氨量测定法蛋白质是生物细胞的主要成分，核酸、类脂等中也含有一定量的氮素。已知细菌细胞干重的含氮量一般为12％～15％，因此，只要用化学分析方法测出待测样品的含氮量，就能推算出细胞的生物量。二、细胞生物量的测定3.DNA含量测定法微生物细胞中的DNA含量虽然不高(如大肠杆菌中约占3％～4％)，但由于其含量较为稳定，有人估算出每一个细菌细胞平均含DNA8.4×10-5ng，因而也可以根据分离出的样品中的DNA含量来计算微生物的生物量。二、细胞生物量的测定【任务指导】（一）

5、了解血球计数板的构造、计数原理和计数方法（见背景知识）（二）实验操作任务8-1显微镜直接计数二、细胞生物量的测定【任务指导】（一）实验前的准备工作（二）实验操作1.样品稀释液的制备2.平板接种培养图8-3混菌摇匀方式及步骤示意图任务8-2平板菌落计数二、细胞生物量的测定（三）计数和报告1.操作方法：培养到时间后，计数每个平板上的菌落数2.到达规定培养时间，应立即计数。如果不能立即计数，应将平板放置于0～4℃，但不得超过24h。（四）注意事项1.各稀释度菌液移入无菌培养皿内时，要“对号入座”，切莫混淆。2.不要直接取用来自冰箱的稀释液，以防因冷冻刺激影响活细胞生长繁殖而使菌落形成

6、率受影响。二、细胞生物量的测定3.每支移液管只能接触一个稀释度的菌液试管，每支移液管在移取菌液前，都必须在待移菌液中来回吹吸几次，使菌液充分混匀并让移液管内壁达到吸附平衡4.菌液加入培养皿后要尽快倒入融化并冷却至50℃左右的琼脂培养基液，立即摇匀，否则菌体细胞常会吸附在皿底上，不易形成均匀分布的单菌落，从而影响计数的准确性。菌种保藏的基本原理1项目九菌种保藏技术细胞生物量的测定2项目九菌种保藏技术学习认识几种菌种保藏的方法了解每种保藏法的特点；掌握菌种保藏方法的基本原理。知识目标项目九菌种保藏技术能够选用合适的方法保存菌种；能够进行实验室保存菌种的基本操作。能力目标项目九菌种保

7、藏技术菌种是一个国家所拥有的重要生物资源，菌种保藏是一项极其重要的微生物学基础工作。在自然条件下，菌种的污染、死亡和生产性能的逐渐下降是不可避免的。背景知识一、菌种保藏的基本原理微生物具有容易变异的特性，因此，在保藏过程中，必须使微生物的代谢处于最不活跃或相对静止的状态，但又不至于死亡，才能在一定的时间内使其不发生变异而又保持生活能力，从而达到保藏的目的。一、菌种保藏的基本原理水分对生化反应和一切生命活动至关重要，因此，干燥尤其是深度干燥，在保藏中占有首要地位就不言而喻了除水分外，低温乃是保