微生物检验技术项目六 微生物的分离 纯化 培养技术.pptx

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1、项目六微生物的分离、纯化、培养技术微生物检验技术接种技术1项目六微生物的分离、纯化、培养技术分离提纯2项目六微生物的分离、纯化、培养技术了解纯种分离技术、无菌操作技术应用的广泛性掌握微生物分离纯化的基本原理。知识目标项目六微生物的分离、纯化、培养技术能够熟练的进行无菌操作。能够熟练的进行微生物的分离和纯化。能够根据不同微生物的培养要求选择合适的培养方法。能够根据微生物的菌落形态，识别细菌、放线菌、酵母菌、霉菌这四大类能力目标项目六微生物的分离、纯化、培养技术微生物由于其个体微小，在绝大多数情况下都是利用群体来研究其属性，微生物的物种（菌种）一般也是以群体

2、的形式进行繁衍、保存。背景知识一、接种技术1.接种工具最常用的接种或移植工具为接种环。图6-1常用的接种工具1．接种针2．接种环3．接种钩4．接种铲5．移液管6．滴管7．玻璃涂布棒8.微量取液器一、接种技术2．接种操作是微生物学研究中最常用的基本操作技术。无菌操作的目的：一是保证纯培养物不被环境中微生物的污染;二是防止微生物培养物在操作过程中污染环境或感染操作人员。二、分离纯化技术不同微生物在特定的培养基上生长形成的菌落或菌苔一般都具有稳定的特征，可以作为对该微生物进行分类、鉴定的重要依据。1.稀释倒平板法2.涂布平板法3.平板划线分离法4.稀释摇管法（

3、一）用固体培养基分离纯培养二、分离纯化技术通常采用的液体培养基分离法是稀释法。接种物在液体培养基中进行顺序稀释，以得到高度稀释的效果，使一只试管中分配不到一个微生物。稀释法有一个缺点，它只能分离出混杂微生物群体中占数量优势的种类。（二）用液体培养基分离纯培养二、分离纯化技术在显微镜下，用安装在显微镜挑取器上的极细的毛细吸管，从混杂群体中直接对准某一个细胞后挑取，分离单个细胞或单个个体，再接种于培养基上培养，称为单细胞（单孢子）分离法。（三）单细胞（单孢子）分离二、分离纯化技术没有一种培养基或一种培养条件能满足自然界一切微生物生长的要求，在一定程度上所有的

4、培养基都是有选择性的。1.利用选择培养基进行直接分离2.富集培养（四）选择培养分离二、分离纯化技术分离的目的通常是要得到纯培养物。然而，在有些情况下这是做不到的或是很难做到的，可用二元培养物作为纯化培养的替代物。只有一种微生物的培养物称为纯培养物，培养物中只含有二种微生物，而且是有意识地保持二者之间特定关系的培养物称为二元培养物。（五）二元培养物二、分离纯化技术【任务验收标准】1．掌握无菌操作的程序和操作要点；2．能够进行斜面接种、液体接种和穿刺接种。任务6-1微生物的接种二、分离纯化技术【任务完成条件】1．枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis

5、）；2．牛肉膏蛋白胨培养基的固体斜面、液体培养基试管及半固体培养基试管、5％石炭酸溶液；3．试管、接种环、接种针、酒精灯、酒精棉球瓶、镊子、记号笔等。二、分离纯化技术【工作任务】1．每位同学独立完成斜面接种、液体接种和穿刺接种的实验操作。在接种过程中学习和掌握无菌操作技术。2．检查培养物是否为纯培养，若出现污染分析原因，反复练习无菌操作技术。二、分离纯化技术【任务指导】一、接种技术1．斜面接种技术图6－2斜面接种操作过程1—灼烧接种环；2—拔取棉塞；3—灼烧试管口；4—挑取菌种；5—接入斜面培养基；6—灼烧试管口；7—塞好棉塞；8—烧死残留菌体二、分离

6、纯化技术2．液体接种技术3．穿刺接种技术图6-3穿刺接种技术二、分离纯化技术二、培养将上述接过种的试管直立于试管架上，放在37℃或28℃恒温箱中培养24～48h后，观察结果。二、分离纯化技术【报告内容】1．简述无菌操作的基本要求；2．简述斜面接种、液体接种和穿刺接种的操作要领；3．谈谈你完成任务的体会，你认为操作过程中要注意哪些问题。二、分离纯化技术【任务验收标准】1．能够将混杂的各种微生物分离成纯种。2．能够从菌落特征及培养特征区分细菌、酵母菌、放线菌和霉菌。3．掌握划线分离、涂布分离和倾注分离的操作。任务6-2微生物纯种的分离培养及菌落特征观察二、分

7、离纯化技术【任务完成条件】1．土壤样品、混合菌悬液、牛肉膏蛋白胨琼脂培养基、高氏1号培养基、马铃薯培养基（PDA培养基）、5000U/mL链霉素液、0.5%重铬酸钾液或50U/mL制霉素。2．无菌培养皿、无菌吸管、盛9mL无菌水的试管、盛45mL无菌水并带有玻璃珠的三角烧瓶、无菌玻璃涂布棒、接种环、酒精灯、火柴、恒温培养箱。二、分离纯化技术【工作任务】1.用稀释分离法分离微生物成纯种2．用平板划线法分离细菌3．观察菌落特征二、分离纯化技术【任务指导】（一）制备土壤稀释液1．制备土壤悬液2．制备土壤稀释液图6-4土壤稀释液的制备二、分离纯化技术（二）分离微

8、生物1．划线法分离细菌图6-5平板划线法示意图A－连续划线法（1、2为依次划线的