微生物分离与纯化技术

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1、微生物分离与纯化技术环境学院　朱红力环境微生物课程实验一、实验目的掌握从土壤中分离培养微生物的方法，从而获得若干种微生物纯培养技能。二、实验器材及设备1、无菌培养皿(直径90毫米)、无菌吸管1毫升、盛有90毫升无菌水的锥形瓶、盛有9毫升无菌水的试管5支。2、培养基(已灭菌的)、土壤颗粒。3、接种环、酒精灯、恒温箱(培养箱)、超净工作台等。三、微生物分离纯化的操作方法1、取样（取土样10g）2、稀释土壤悬浊液介绍两种方法：稀释混合平板法和平板划线法（一）稀释混合平板分离法（以分离真菌为例）稀释土壤悬浊液操作注意：依次编号：按10-1、10-2、10-3、10-4、10-5及

2、10-6锥形瓶中的玻璃珠将颗粒状样品打散无菌操作：超净工作台、酒精灯、无菌吸管移液管移液后多余的液体处理试管中悬浊液须持移液管吹洗三次搅匀3、平板的制作每组准备两套无菌培养皿，在皿底注明稀释液浓度（10-4、10-5、10-6中任选两种浓度)、菌名如黑曲霉、班级、组别。融化锥形瓶中的培养基，放在45-50℃恒温水浴锅中备用制备混合液平板：无菌操作下，打开培养皿在无菌培养皿一边加两滴链霉素液，另一边加１mL土壤稀释液（注意不要让两液相混），倒入45-50℃融化的真菌培养基约1/4-1/3培养皿高度。培养皿平放在桌上顺时针、逆时针轻轻转动，混匀皿中物质。培养基冷凝后即成平板。

3、恒温培养:平板倒置于28-30℃恒温箱中,培养5-6天后观察真菌菌落形态。转接纯化:挑取单个菌落,接种到新鲜平板上,培养观察,直至纯化。平板制作的操作注意：融化培养基时不要溢出烧瓶或糊底无菌操作下，打开培养皿的操作一根１mL移液管多次移液先移低浓度悬浊液，再移高浓度悬浊液。移液管可以用稀释悬浊液的那根在无菌操作下接着做，也可另取一根无菌的。为什么培养皿要倒置培养(二)平板划线分离法（以分离细菌为例）每组准备两套无菌培养皿,在皿底菌名、班级、组别。融化培养基，在45-50℃恒温水浴锅中备用制备平板：无菌操作下，打开培养皿，倒入45-50℃融化的细菌培养基约1/4-1/3培养

4、皿高度。培养皿平放在桌上，培养基冷凝后即成平板。平板划线:无菌操作下,用接种环挑取一环10-1土壤悬浊液,在平板上轻轻划线(切勿划破培养基)划线的方式可取下图恒温培养:平板倒置于28-30℃恒温箱中,培养１-２天后观察细菌菌落形态。转接纯化:挑取单个菌落,接种到新鲜平板上,培养观察,直至纯化平板划线的操作注意：接种换环的使用分区域划线，划完第一个区域，烧掉接种环上的剩余物，接种环冷却后，通过第一次划线部分，做第二次划线，依次类推，目的是稀释微生物浓度，使长成单个菌落。