微生物实验-平板菌落计数与菌种分离纯化技术

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1、实验内容实验一、显微镜的使用与单染色法实验二、革兰氏染色与荚膜染色实验三、放线菌形态观察与芽孢染色实验四、霉菌形态观察与各大类微生物菌落特征实验五、酵母菌形态观察、显微计数与显微测量技术实验六、培养基的制备实验七、菌种分离纯化技术与平板菌落计数实验八、水质微生物学检测实验九、消毒与灭菌技术实验七、菌种分离纯化与平板菌落计数一、实验目的1、学习并掌握平板菌落计数的技术方法。2、学习并掌握微生物分离纯化技术方法。3、了解土壤微生物区系的组成。二、实验原理土壤是微生物生活的大本营，其中含有大量不同类型的微生物，可按照一定的方法将各类微生物通过分离进行纯培养，

2、并能对特定类群进行数量测定。基本原理是通过稀释使菌体细胞充分分散，单细胞得以生长发育形成菌落。可使用稀释法或平板划线法进一步纯化，还可通过平板菌落计数，推算单位重量土壤样品含有微生物的数量。三、实验内容（一）土壤样品的采集采样一般定点于距离土表1－20cm处，先除去表土1－2cm，以无菌铲采土并用无菌塑料袋分装。（二）微生物平板菌落计数及分离纯化1、制备土样稀释液（1）称取1g土壤，加至100ml无菌水中，充分振荡15分钟，使土壤颗粒完全打散，土壤中的微生物充分分散到土壤溶液中去。（2）无菌操作，系列稀释至10-8。2、平板菌落计数（1）平板涂布法①

3、倒平板将培养基（PDA）加热融化，待冷至45~50℃倒平板，每种培养基倒三皿；②涂布用无菌吸管分别由10-4，10-5，10-6三管土壤稀释液中各取0.1ml加入培养皿，用玻璃涂棒涂匀并做好记号；③培养倒置于28℃培养箱中培养3~5d；注意：要有无菌水的对照（CK）！④计数培养48h后，取出培养平板，算出同一稀释度三个平板上的菌落，并按下列公式进行计算：每克土样中细菌数＝同一稀释度三次重复的平均菌落数×稀释倍数（2）、倾注平板法①样品制备（土样稀释）同上②取样用三支1ml无菌吸管分别吸取10-6、10-7和10-8的稀释菌悬液各1ml，对号放入编好号

4、的无菌平皿，每个稀释度放3个平皿。③倒平板向上述平皿中倒入45℃左右的牛肉膏蛋白胨培养基约15毫升/平皿，水平迅速旋动平皿，使培养基与菌液混合均匀，而又不使培养基荡出平皿或溅到平皿盖上。待培养基凝固后，将平板倒置于37℃恒温培养箱中培养。注意：要有无菌水的对照（CK）④计数培养48h后，取出培养平板，算出同一稀释度三个平板上的菌落，并按下列公式进行计算：每克土样中细菌数＝同一稀释度三次重复的平均菌落数×稀释倍数（1）倒平板按稀释涂布平板倒平板，并用记号标明培养基名称，土样编号和实验日期；（2）划线在近火焰处，左手拿皿底，右手拿接种环，挑取上述的土壤悬

5、液一环在平板上划线。划线的方法很多，但无论采用那种方法，其目的都是通过划线将样品在平板上进行稀释，使之形成单个菌落；（3）菌种转接取单菌落，转接至试管斜面，37度，培养24小时。保存备用。3、平板划线分离法（三）培养基的制作乳糖蛋白胨培养基（300ml）配方：蛋白胨：10.0g4.0g牛肉膏：3.0g1.2g乳糖：5.0g2.0gNaCL：5.0g2.0g溴甲酚紫乙醇溶液0.4ml水：1000ml400ml分装：40支18×180㎜试管10ml/管住：先加杜氏小管再分装液面略高于杜氏小管四、实验报告1、计算土壤样品中细菌、真菌的含量。2、常见的微生物分

6、离纯化的方法及原理。