猪源益生乳酸杆菌的分离选育.pdf

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1、第11期总第209期农业科技与装备No．11ToralNo．2092011年11月AgriculturalScience&TechnologyandEquipmentNOV．2011猪源益生乳酸杆菌的分离选育袁书林，一，：孔庆新，金锋17郭小华(1．江苏食品职业技术学院，江苏淮安223003；2．淮安淮大科技发展有限公司，江苏淮安223005)摘要：为提高仔猪抵抗胃肠道菌群失衡的能力，采用：分离选育的方法，从仔猪胃部分离出70株乳酸杆菌、肠道分离出345株乳酸杆菌。对分离出的菌株进行耐酸、耐胆盐、耐高铜、耐胃蛋白酶选育，并进行大肠杆菌抑菌性试验。综合各项分离选育指标。最终

2、分离选育出I一69和I-152菌株，作为优良饲料添加剂研发的开发菌株。关键词：f猪；乳酸杆菌；益生菌；分离中图分类号：$852文献标识码：A文章编号：1674—1161(2011)l1-0027-03现代集约化养猪的饲养条件不利于肠道正常菌330472全自动菌落快速计数仪、CKX31奥林巴斯倒群的建立，外界环境条件变化时容易导致仔猪胃肠道置显微镜。、微生物菌群失衡，降低病原菌抵抗力，从而致使仔猪1．3试验方法断奶时发生腹泻。从断奶到肥育前期，仔猪断奶腹泻1．3．1乳酸杆菌的分离鉴定剖杀仔猪，无菌取胃、肠道造成的损失约占全部损失的75％。益生素是以活微(十二指肠、空肠、回肠

3、、盲肠和结肠)粘膜，用无菌生生物为主，菌株可在胃肠道特定部位粘附、定植和生理盐水洗掉粘膜上的食糜；将粘膜浸入装有15mL长，通过改善胃肠道的微生态平衡，对动物生长和健HEPES缓冲液的烧杯中，用镊子来回摇动粘膜5康起到有益作用的制剂。益生素主要通过改善胃肠道min；用无菌注射器吸取0．2mL上清液．注入Hungate的微生物菌群平衡来提高动物的健康水平，进而提高滚管培养基，37℃培养72h后，于4oC贮藏．备用。乳动物抵抗病原菌的能力和促进动物生长。酸杆菌初步鉴定按《常见细菌系统鉴定手册》进行。本试验通过对猪源益生乳酸杆菌的分离选育，研1．3．2乳酸杆菌的耐酸性选育将胃乳

4、杆菌和肠乳杆菌发一种具有高度抗逆性，能耐受胃酸、胆盐和高铜，且24h培养物按5~(v／v)的接种量接种于pH3．0的产乳酸水平高、抑制大肠杆菌能力强的益生乳酸杆菌MRS培养基，置37℃恒温摇床中培养8h后。取0．1制剂．旨在为绿色饲料添加剂的开发研制开辟新途mL菌悬液进行菌落计数，计算存活率。同时以pH径。6．0的MRS培养基为对照。存活率计算公式为：S=ns／1材料与方法no。式中：no为处理前活菌数，CFU／mL；n8为pH2．51．1材料与试剂的MRS培养基培养8h后活菌数，CFU／mL。健康仔猪6头，平均体重8．9±1．1kg。大肠杆菌1．3．3耐胆盐的选育在MR

5、S液体培养基中分别添加O139、K88、F41由江苏食品职业技术学院实验室保0．1％、0．2％、0．3％(V／V)的牛胆盐。取筛选出的耐酸存。肠乳杆菌24h培养物，按5％(v／v)的接种量接种于革兰氏染色液、牛胆盐、乳酸、醋酸、盐酸、胃蛋白MRS液体培养基，并于37恒温摇床中培养8h后，酶(Sigma)、无水硫酸铜、生理盐水、MRS培养基、PYG取0．1mL菌悬液进行菌落计数。琼脂平板。1．3．4耐高铜的选育取经24h培养的耐酸胃乳杆菌1．2仪器与设备和耐酸、胆盐的肠乳杆菌培养物，按5％(v／v)的接种PHS一3C酸度计、HS一211C恒温摇床、JLJ一量接种于厌氧MRS

6、液体培养基(含铜250mg／kg)，培养72h，观察其耐受情况。1．3．5胃蛋白酶耐受性试验将经24h培养的耐高铜乳收稿日期：2011-02—12酸杆菌培养物按5％(v／v)的接种量，接种于pH3．0基金项目：淮安市科技支撑计划(农业)项目(SN0874)；江苏且添加了5mg／mL胃蛋白酶(3oooNFU／mg)的液体省科技型企业创新资金(BC2010142)MRS培养基，于37cc恒温摇床中培养8h。同时，以作者简介：袁书林(1977一)，男，副教授，博士，从事动物营养方面的研究。pH6．0且不添加胃蛋白酶的液体MRS培养基为对农业科技与装备2011年11月照。取O1m

7、L菌悬液进行菌落计数，计算存活率。2．2乳酸杆菌耐酸性选育结果1．3．6抑菌性试验将大肠杆菌0139、K88、F41分别经检测，有13株胃乳酸杆菌和87株肠乳酸杆菌均匀涂布于PYG琼脂平板上，用直径6mm的无菌的存活率在20％～60％之间。这与Conway等报道的结打孔器打孔并封底。将经24h培养的耐胃蛋白酶乳果接近。胃乳酸杆菌必须能在低pH条件下生长，才酸杆菌培养物在5000r／min下离心3min，取上清能在胃中生长繁殖，而肠乳酸杆菌只要以较高的存活液70L注入孔中，置37cC培养28h，测量抑菌圈率耐过胃酸性环境。保证有