乳酸杆菌与枯草芽孢杆菌抗逆性及其对猪和小鼠益生作用的研究

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1、安徽农业大学硕士学位论文乳酸杆菌与枯草芽孢杆菌抗逆性及其对猪和小鼠益生作用的研究姓名：王井亮申请学位级别：硕士专业：动物营养与饲料科学指导教师：周明；汪海峰201206摘要选用5株肠源乳酸杆菌和1株商用乳酸杆菌LGG以与1株肠源枯草芽孢杆菌作为研究对象，对其抗逆性和产酶产酸力及其在猪、鼠中的应用效果进行研究。1．以5株肠源乳酸杆菌和1株商用乳酸杆菌LGG为对象，研究其抗逆性和产酸力。结果显示：各菌株对外界因子的耐受性存在一定的差异。菌株LGG生长速度、产酸力、耐酸性都较其它菌株好，但其耐高温能力较

2、差，在65℃处理10min时存活率只有0．2％；菌株ZJ614耐高温能力较强，在65℃处理20min存活率仍能达到19．2％，但在50mg／L的Cu离子中培养12h，其菌液OD600值仅为0．55，说明其对Cu离子较敏感；菌株zJ621虽对酸的耐受性较强，但对胆盐较为敏感，在O．1％的胆盐浓度下，培养8h存活率仅为6．7％；菌株ZJ623虽有较好的生产特性，但是其耐酸性更易受时间的影响，培养4h和8h对其存活率影响较大，说明其稳定性相对较差；经综合评价，筛选出了2株生长特性、体外环境耐受性较好的菌

3、株ZJ610和ZJ617。2．以1株肠源枯草芽孢杆菌为对象，研究其抗逆性和产酶力。结果显示：①菌株在pH3．O的营养肉汤中6h后，存活率仍能达到47．5％；②在胆盐浓度为O．3％的营养肉汤中8h后，存活率仍能达到40．4％；③在90℃下，处理20min后存活率仍能达到33．3％；④当Cu离子和zn离子浓度为500mg／L时，菌株生长量相当于对照的107．6％和86．7％；⑤菌株培养48h后上清的蛋白酶和淀粉酶活性分别为655．2U和1．89U。3．选用筛选出的2株肠源乳酸杆菌ZJ610和ZJ617

4、和1株肠源枯草芽孢杆菌进行断奶仔猪饲养试验。将270头杜x长x大断奶仔猪随机分为3个处理组，分别为对照组、有抗生素组、混合益生菌组。结果显示：①在断奶仔猪日粮添加混合益生菌后，与对照组相比，末重、日增重分别提高了O．7％、1．7％，日均耗料、料重比分别降低6．0％、7．7％，差异不显著；与无抗生素组相比，末重、日均耗料、日增重分别降低了3．8％、6．7％、8．O％，料重比提高1．7％，差异不显著。腹泻指数方面，对照组最高达到2．97％，混合益生菌和抗生素组分别为2．26％和2．24％。②不同处理组

5、粪样DGGE图谱的条带数存在一定变化，混合益生菌组条带数(52．2土5．8)多于抗生素组(48．o土5．6)，少于对照组(57．2士2．9)，差异不显著(P>0．05)；对照组较抗生素组条带数高出19．2％，达到显著性水平(氏0．05)；混合益生菌组多样性指数(1．70士0．05)高于抗生素组(1．66士0．05)，低于对照组(1．74士0．02)，差异不显著(尸>0．05)，另外，对照组较抗生素组多样性指数高4．8％，达到显著性水平(尸

6、IL．12含量最高，对照组最低，三个处理组之间差异达到极显著水平(尸0．05)。4．选用筛选出的2株肠源乳酸杆菌ZJ610和ZJ617和1株肠源枯草芽孢杆菌进行小鼠灌胃试验。取6周龄BALB／C雌性小鼠48只，于正饲期每天早上灌服不同处理的10％的脱脂奶粉O．5ml，连续灌服14d。其中E．coli0157：H7攻毒组E、F、G、H于试验第Od、7d攻毒，攻

7、毒剂量为0．5ml／只含E．coliOl57：H7108cm／m1的10％脱脂奶粉。结果显示：①各处理组小鼠日均耗料量和体重随试验天数的增加而有逐渐增多的趋势，但各组之间差异不明显。②未攻毒组：对照组条带数最多为(54．67士5．03)，乳酸杆菌组条带数最少为(41．00士6．08)，各组之间没有显著差异(尸>O．05)；多样性指数对照组组最高为(1．69士O．05)，乳酸杆菌组和混合菌组多样性指数最低，都为(1．56士O．06)，各组之间没有显著性差异(P>O．05)。⑧攻毒组：攻毒乳酸菌组条带

8、数最多为(48．00士11．14)，攻毒枯草芽孢杆菌组条带数最少为(34．Oo士7．00)，各组之间没有显著差异(尸>0．05)；多样性指数攻毒乳酸菌组最高为(1．66士0．10)，攻毒对照组多样性指数最少为(1．56土0．06)，各组之间没有显著性差异(胗O．05)。④与对照组相比，添加乳酸杆菌和枯草芽孢杆菌及其混合菌，对小鼠血清中IL6、ILlO、ILl2、TNF．0【没有显著性影响(尸>O．05)；经E．coliol57：H7攻毒，以上指标与未攻毒组比也没有显著性差异(胗0．