广西巴马小型猪ApoE基因真核表达载体的构建及鉴定.pdf

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1、南方农业学报J0uRNAL0FsouTHERNAGRIcuLTuRE2013，44(6)：1022—1025ISSN2095—1191：CODENNNXAABhttp：／／www．nfnyxb．cnDOI：10．3969／j：issn．2095—1191．2013．6．1022广西巴马小型猪ApoE基因真核表达载体的构建及鉴定苏秀珍，蒋钦杨，陈少梅，郭亚芬+，兰干球(广西大学动物科学技术学院，南宁530005)摘要：【目的】构建广西巴马小型猪载脂蛋白E基因(ApoE)真核表达载体，为生产转ApoE基因的广西巴马小型猪奠定基础。【方法】采用RT—PcR从广西巴马小型猪

2、肝组织中扩增出ApoE基因编码序列，将该基因连接至pEGFP—c1载体上，利用双酶切和测序对重组质粒pEGFP．c1一ApoE进行鉴定，并将重组质粒pEGFP—c1一ApoE转染PKl5细胞。【结果】广西巴马小型猪ApoE基因编码区序列长954bp，编码317个氨基酸，与GenBaIll【已公布的猪ApoE基因cDNA序列(NM214308)对应区段同源性为100％。构建的重组质粒pEGFP．c1一ApoE转染PKl5细胞48h后，在荧光显微镜下转染细胞发出荧光，细胞形态清晰，可见细胞核。【结论】广西巴马小型猪ApoE基因能与pEGFP-c1载体重组构建pEGFP．

3、C1一ApoE真核表达载体，有效表达出ApoE蛋白。关键词：广西巴马小型猪；载脂蛋白E基因；pEGFP—c1载体；重组质粒；真核表达载体中图分类号：S828．99；0786文献标志码：A文章编号：2095—1191(2013)06—1022—04ConstructionandidentificationofApoEgeneexpressionVectorforGuangxiBamamini—pigSUXiu—zhen，JIANGQin—yang，CHENShao—mei，GUOYa—fen+，LANGan—qiu(CollegeofAnimalScienceandT

4、echnology，Guallg)【iUniversity，Nanning530005，China)Abstract：【0bjective】AneukaryoticexpressionvectorofApoJ咖叩r0￡e而E(ApoE)geneinGuang)【iBamamini—pigwasconstructedtopmviderefeI℃ncesforpmducingGuangxiBamamini—pigwithApoE【Method】ThecodingsequenceofApoEgenewasampli6edfromliverofGuang)【iBamamin

5、i_p培byRT-PCR，andthissequencewasinsenedintopEGFP-C1Vector．TherecombinantplasmidspEGFP—C1一ApoEwereidentifiedbysequenceanddoubledigestion，andthenthepositiVeplasmidsweretransfectedintoPK15cells．【Result】withthelen昏hof945bp，theApoEgenecodingsequenceofGuangxiBamamini-pigencoded317aminoacidsan

6、dshared100％homologuetothepreviouslyreponedcDNAsequenceinGenBank(NM一214308)．After48hourstransfectionoftherecombinantplasmidspEGFP—Cl—Ap(压intothePKl5cells，thecellshadvisibleexpressionofnuorescentandcellnucleus．【conclusion】The却oEgeneofGuangxiBamamini—pigcanrecombineintopEGFP—C1VectorandeⅡ

7、宅ctivelyexpresstheApolipopmteinE．Keywords：GuangxiBamamini—pig；ApoEgene；pEGFP—C1vector；recombinantplasmids；eukaryoticexpressionvPPtnr0引言【研究意义】阿尔茨海默病(AlzIleimer’sdisease，AD)俗称老年痴呆症，是严重影响老年人身心健康的主要疾病之一，目前我国患AD的人数高达600万人，居世界第一。AD是由遗传因素和环境因素共同作用所形成，其中遗传因素在AD尤其家族性AD的发病中起重要作用(杜琳，2008)。现已确定与